譯后修飾(post-translational modifications,PTM)是指蛋白質(zhì)在翻譯后經(jīng)歷的一種共價加工過程,通過在一個或多個氨基酸殘基上添加修飾基團,或通過蛋白質(zhì)水解去除特定基團,從而改變蛋白質(zhì)的性質(zhì)。PTM類型包括經(jīng)典的磷酸化(phosphorylation)、甲基化修飾(methylation)、 棕櫚?;╬almitoylation),以及新近發(fā)現(xiàn)的乙?;╝cetylation)、丙二?;╩alonylation)、琥珀?;╯uccinylation)、乳酸?;╨actylation)和糖基化(glycosylation)等。修飾性抗體因其能夠特異性識別被修飾的氨基酸位點,廣泛用于對相關(guān)蛋白質(zhì)的定性和定量分析,是科研人員研究PTM在重要生命過程(如轉(zhuǎn)錄、重組、復(fù)制、DNA修復(fù)和基因組結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié))中的功能和作用時不可或缺的試劑。
修飾性抗體類型
磷酸化及磷酸化抗體
磷酸化修飾是指在細胞內(nèi)蛋白質(zhì)氨基酸上添加磷酸基團的過程。20世紀(jì)50年代,Edmond Henri Fischer 和 Edwin Krebs 發(fā)現(xiàn)了第一個蛋白激酶,即環(huán)腺苷酸依賴性蛋白激酶(cyclic-AMP dependent protein kinase, PKA),并首次提出了蛋白質(zhì)可逆磷酸化修飾作為一種生物調(diào)節(jié)機制存在的概念。蛋白質(zhì)磷酸化修飾是一個由激酶和磷酸酶共同參與的動態(tài)調(diào)節(jié)過程。激酶負責(zé)催化蛋白質(zhì)的磷酸化,將三磷酸腺苷(ATP)末端(γ位)的磷酸基團轉(zhuǎn)移到底物蛋白的特定氨基酸上,從而進行共價修飾。磷酸酶則通過水解反應(yīng)催化已發(fā)生磷酸化修飾的氨基酸去磷酸化,將磷酸單酯水解為一個磷酸基團和一個游離羥基,以去除磷酸基團。了解磷酸化修飾的機制和功能對于研究細胞信號傳導(dǎo)和生物調(diào)節(jié)至關(guān)重要。
磷酸化抗體能夠特異性識別特定的磷酸化位點,從而檢測蛋白在細胞受到刺激時磷酸化水平的增強或減弱。這些抗體反映了蛋白功能狀態(tài)的變化,適用于磷酸化蛋白的定性和定量分析。磷酸化抗體在免疫學(xué)、生物化學(xué)、腫瘤學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)中得到了廣泛應(yīng)用,尤其在細胞信號傳導(dǎo)、細胞凋亡和癌癥等生命科學(xué)研究領(lǐng)域中起著重要作用。
甲基化及甲基化抗體
蛋白質(zhì)甲基化是由甲基化酶催化作用于蛋白質(zhì)特定殘基的一種重要動態(tài)修飾和生物學(xué)現(xiàn)象,參與調(diào)控蛋白質(zhì)信號通路。常見的甲基化修飾包括DNA甲基化、RNA甲基化和組蛋白甲基化。由于甲基化修飾在細胞信號傳導(dǎo)、基因功能和遺傳改變中起著重要作用,甲基化特異性抗體的制備顯得尤為重要。甲基化抗體能夠特異性識別特定的甲基化氨基酸位點,用于區(qū)分蛋白質(zhì)的甲基化和非甲基化形式。它們可以對甲基化蛋白質(zhì)進行定性和定量分析,廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、生物化學(xué)、腫瘤學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)等生命科學(xué)研究領(lǐng)域。
乙?;耙阴;贵w
蛋白質(zhì)乙?;亲畛R姷孽;揎楊愋椭?,最早由Allfrey等人在1963年于組蛋白上首次發(fā)現(xiàn)。根據(jù)乙酰化修飾發(fā)生的位置不同,乙酰化修飾可以分為三種類型:Nα-乙?;ε-乙?;蚈-乙?;?。這些修飾在調(diào)控蛋白質(zhì)功能和細胞過程方面具有重要作用。
乙?;贵w能特異性識別靶蛋白的乙?;问郊疤囟ㄒ阴;被嵛稽c,檢測該蛋白質(zhì)的活性水平,用于區(qū)分蛋白質(zhì)乙?;头且阴;拇嬖谛问?,對乙?;鞍走M行定性、定量分析,在細胞周期的調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、神經(jīng)退行性疾病、代謝疾病、癌癥的發(fā)生發(fā)展等生命科學(xué)研究中應(yīng)用廣泛。
修飾性抗體制備服務(wù)普健生物提供的一站式修飾性抗體制備服務(wù),包括多肽的設(shè)計與合成、多肽偶聯(lián)、動物免疫、抗體純化和QC檢測等。普健生物在修飾性抗體定制開發(fā)方面具有豐富的經(jīng)驗,可提供磷酸化磷酸化抗體、甲基化抗體、乙酰化抗體的多克隆抗體服務(wù)和單克隆抗體服務(wù)。
服務(wù)周期
6-8周
服務(wù)內(nèi)容
修飾性多肽設(shè)計與合成:根據(jù)客戶提供的抗原蛋白序列和修飾位點免費進行抗原設(shè)計,依照客戶需求合成修飾性多肽和非修飾性多肽
動物免疫:多肽抗原將被用來免疫動物(大鼠/小鼠/兔)并激發(fā)其產(chǎn)生針對特定抗原的抗體??商峁┌ㄍ谩⑿∈?、大鼠、豚鼠、羊、雞的多克隆抗體定制服務(wù)以及大鼠、小鼠的單克隆抗體定制服務(wù)。
血清效價檢測:檢測第三次免疫、第四次免疫后的效價,免疫血清效價>1:128000
抗體純化:使用修飾性與非修飾性多肽兩輪親和純化
抗體驗證:WB和IF、流式驗證純化后抗體,也可根據(jù)需求提供SDS-PAGE、ELISA鑒定
交付內(nèi)容
多肽、未純化抗血清小樣、純化獲得的抗體(多抗)或大鼠、小鼠單克隆抗體(單抗)、singleB免單抗(序列)、1-3株單克隆細胞株、技術(shù)服務(wù)報告等。
最終交付的抗體經(jīng)過多重檢測驗證,確??商禺愋宰R別磷酸化(phosphorylated)/甲基化(methylated)/乙酰化(acetylated)的氨基酸位點。普健生物還可以按客戶實際應(yīng)用要求制定個性化免疫、篩選及檢測方案,以滿足客戶驗證要求。
普健生物協(xié)助客戶發(fā)表文獻展示
2024年1月,中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所與中國科學(xué)院武漢病毒研究所合作,在《Journal of Cell Biology》上發(fā)表了題為“BLK positively regulates TLR/IL-1R signaling by catalyzing TOLLIP phosphorylation”的研究論文。研究發(fā)現(xiàn),酪氨酸激酶BLK催化TOLLIP在Y76、Y86和Y152位點磷酸化,引發(fā)下游炎癥信號級聯(lián)反應(yīng)。文中使用的磷酸化抗體p-TOLLIP-Y86由普健生物定制提供(詳情見下圖)。