昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng) (BEVS) 是一種利用桿狀病毒作為外源基因的載體,通過感染昆蟲細(xì)胞或者昆蟲幼蟲來表達(dá)外源蛋白的系統(tǒng),是重要的真核表達(dá)系統(tǒng)之一。
1.昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢:
a.桿狀病毒安全性好
b.攜帶外源基因的容量大
c.外源目的蛋白質(zhì)表達(dá)水平高
d.表達(dá)的真核基因產(chǎn)品可以進(jìn)行正確的折疊與修飾,因而具有良好的生物活性。
2.與哺乳細(xì)胞相比昆蟲表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢:
a.培養(yǎng)條件相對簡單,不需要CO2
b.不容易被細(xì)菌污染
c.能進(jìn)行蛋白翻譯后糖基化修飾
d.大規(guī)模生產(chǎn)條件簡單,更易獲得大量蛋白
常見的表達(dá)載體及特征
載體 | 特征 |
pFastBac1 |
用于高水平蛋白表達(dá)的強(qiáng)AcMNPV多角體基因 (PH)啟動子 用于簡化克隆的大型多克隆站點(diǎn) |
pFastBacHT |
用于高水平蛋白表達(dá)的強(qiáng)多角體(PH)啟動子 用于使用金屬螯合樹脂純化重組融合蛋白的N端6His標(biāo)簽,以及用于在蛋白純化后去除6His標(biāo)簽的TEV蛋白酶裂解位點(diǎn) 用于簡化克隆的三個(gè)讀碼框的載體 |
pFastBacDual |
用于同時(shí)表達(dá)兩種蛋白的兩個(gè)強(qiáng)桿狀病毒啟動子(PH 和 p10) 用于簡化克隆的兩個(gè)大型多克隆位點(diǎn) |
常見的表達(dá)細(xì)胞及特征
細(xì)胞 | 來源 | 用途 |
Sf9 | Sf9細(xì)胞系克隆分IPLBSF21-AE(Sf21),來源于秋蠅蠕蟲(草地夜蛾)蛹的卵巢組織 |
適于轉(zhuǎn)染、純化、生產(chǎn)高滴度病毒、鋪板以及表達(dá)重組蛋白 |
Sf21 |
Sf21細(xì)胞衍生于IPLBSF-21細(xì)胞系,也來源于秋蠅蠕蟲(草地夜蛾)蛹的卵巢組織 |
也適于轉(zhuǎn)染、純化、生產(chǎn)高滴度病毒、鋪板以及表達(dá)重組蛋白。在一些結(jié)構(gòu)上Sf21細(xì)胞可能比Sf9細(xì)胞表達(dá)蛋白量高 |
Hi5 |
Hi5細(xì)胞系源于博伊斯湯普森研究所對植物的研究和源于白菜尺蠖卵巢細(xì)胞,粉紋夜蛾細(xì)胞 |
Hi5細(xì)胞表達(dá)重組病毒性能優(yōu)越, 經(jīng)常用于轉(zhuǎn)染和空斑純化,也適用于表達(dá)分泌型重組蛋白 |
S2 |
S2是一種果蠅晚期胚胎細(xì)胞。其中多為雌性四倍體細(xì)胞,也有雙倍體細(xì)胞 |
比較適合重組蛋白的表達(dá) |