昆蟲表達系統(tǒng)

昆蟲表達系統(tǒng)，尤其以桿狀病毒表達系統(tǒng)（Baculovirus Expression Vector System, BEVS）為代表，已經(jīng)成為一種廣泛應(yīng)用的異源蛋白生產(chǎn)手段。桿狀病毒感染昆蟲細胞后，其基因組上的外源基因在病毒復(fù)制過程中被轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而高效表達目標蛋白。這類系統(tǒng)不僅能夠高效表達各種類型的目標蛋白，而且在蛋白后修飾、規(guī)模化生產(chǎn)等方面展現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢。

1）高級后修飾能力：與原核表達系統(tǒng)如大腸桿菌相比，昆蟲細胞能夠執(zhí)行復(fù)雜的后修飾過程，包括糖基化、磷酸化、二硫鍵形成等，這對于需要特定翻譯后修飾以維持功能的蛋白質(zhì)至關(guān)重要。

2）高表達水平：BEVS能夠驅(qū)動高水平的蛋白表達，部分情況下可達每升培養(yǎng)液數(shù)克的濃度，滿足工業(yè)化生產(chǎn)的要求。

3）易于放大與操作：昆蟲細胞，如SF9和High Five細胞，能夠在搖瓶、攪拌罐等多種培養(yǎng)體系中良好生長，便于從小規(guī)模試驗快速過渡到大規(guī)模生產(chǎn)。

4）安全性與合規(guī)性：昆蟲細胞和桿狀病毒對哺乳動物沒有致病性，這減少了生物安全風險，同時也意味著相關(guān)產(chǎn)品較容易通過藥品監(jiān)管審查。

5）宿主范圍廣泛：除了傳統(tǒng)的昆蟲細胞系之外，BEVS也成功應(yīng)用于哺乳動物細胞、植物細胞乃至酵母中，顯示出了極大的靈活性和通用性。

應(yīng)用場景

疫苗生產(chǎn)：桿狀病毒/昆蟲細胞系統(tǒng)常用于生產(chǎn)重組病毒樣顆粒（VLPs）、亞單位疫苗等，如流感、HPV疫苗的部分成分。

生物制藥：包括抗體、酶、生長因子等各種治療性蛋白的生產(chǎn)。

基礎(chǔ)研究：作為研究信號傳導(dǎo)、蛋白質(zhì)互作等功能的工具，昆蟲細胞提供了接近哺乳動物細胞的表達環(huán)境。

農(nóng)業(yè)生物技術(shù)：利用轉(zhuǎn)基因昆蟲抵抗害蟲侵襲，減少化學(xué)農(nóng)藥的使用。

普健生物優(yōu)勢：

1.普健生物利用經(jīng)典Bac-to-Bac技術(shù)，打造了一個快速簡便高效的桿狀病毒表達平臺;該技術(shù)能夠快速地產(chǎn)生重組病毒，而且不需要繁瑣的空斑分析，大大提高了效率。

2.蛋白生產(chǎn)的周期短，通量大。可以實現(xiàn)細胞從小規(guī)模培養(yǎng)到大規(guī)模發(fā)酵的過程，使得蛋白產(chǎn)物甚至可以達到100mg/L的級別。

3.提供免費的病毒粒子擴增和儲存服務(wù)，儲存期長達2年。

案例：昆蟲-桿狀病毒系統(tǒng)表達大蛋白A(272 KD)

普健采用昆蟲-桿狀病毒表達系統(tǒng)，C端融合6*His標簽表達了大小為272 KD的蛋白A，經(jīng)過P1代表達測試，病毒擴增后分別轉(zhuǎn)染Sf細胞和Tn細胞測定MOl，選取最佳表達條件進行P2代表達測試和200ml表達純化，最終得到的蛋白A純度90%，產(chǎn)量5mq兒。

圖 蛋白A P1代表達純化測試結(jié)果(還原SDS-PAGE)

A.考馬斯亮藍染色；B.WB(ECL發(fā)光，抗His標簽抗體)：第一列陰性對照培養(yǎng)基；1和 2轉(zhuǎn)染的1和2號克隆；Medium：培養(yǎng)基；NPE：可溶上清；DPE：沉淀；+:陽性對照

昆蟲-桿狀病毒表達系統(tǒng)適合純化的蛋白類型：

1. 含有基本糖基化需求的蛋白，如某些抗體片段、生長因子等。

2. 膜蛋白和跨膜蛋白，因昆蟲細胞具有成熟的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體系統(tǒng)，利于膜蛋白的正確折疊和定位。

3. 大規(guī)模生產(chǎn)的疫苗抗原，比如HPV病毒樣顆粒、流感病毒表面蛋白等。

4. 需要快速響應(yīng)和較高產(chǎn)出的蛋白，適合緊急情況下迅速擴大生產(chǎn)規(guī)模的需求

普健生物擁有不同生物表達系統(tǒng)，提供各種重組蛋白的生產(chǎn)純化，涵蓋不同科研領(lǐng)域的熱門靶點，滿足不同客戶的實驗需求。歡迎咨詢！