前面我們和大家具體介紹過“抗體人源化的分類”，今天，我們?cè)谶@里具體再和大家聊聊有關(guān)抗體人源化中的一些介紹過程。

　　抗體人源化作為解決鼠源抗體免疫原性的方式，其制作過程雖然說各有不同，但是，整體的過程也是大致相同的，但是，很多人在實(shí)驗(yàn)的過程中，常常會(huì)碰到一些問題，出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差的現(xiàn)象。其實(shí)這個(gè)問題非常的常見，主要還是因?yàn)槲覀儧]有嚴(yán)格地按照順序來進(jìn)行。下面，普健生物就和大家具體聊聊有關(guān)抗體人源化的實(shí)驗(yàn)步驟。

　　1、抗體可變區(qū)/抗體全長測序

　　通過對(duì)鼠源單克隆抗體細(xì)胞系進(jìn)行可變區(qū)/抗體全長基因序列測序。

　　2、嵌合抗體表達(dá)及抗原抗體結(jié)合分析

　　在過程1的基礎(chǔ)上，結(jié)合可變區(qū)的序列和人源恒定區(qū)進(jìn)行嵌合抗體序列的設(shè)計(jì)，然后再通過哺乳系統(tǒng)來進(jìn)行嵌合抗體的表達(dá);通過對(duì)嵌合抗體的抗原抗體進(jìn)行分析，同時(shí)提供樣本進(jìn)行親和力檢測。

　　3、人源化抗體設(shè)計(jì)

　　通過CDR移植、回復(fù)突變、生物信息學(xué)分析等方法對(duì)抗體的VH和VL區(qū)域進(jìn)行人源化設(shè)計(jì)。

　　4、人源化抗體表達(dá)

　　密碼子優(yōu)化，基因合成，亞克隆，轉(zhuǎn)染，抗體表達(dá)及純化，8-10周。

　　5、人源化抗體性質(zhì)檢測

　　結(jié)合力檢測：ELISA/FACS測定EC50值，或Biacore/Octet測定Kd值;人源化抗體體外生物活性分析并與嵌合抗體進(jìn)行比較;人源化抗體與同源性物種的交叉反應(yīng)性分析;人源化抗體生物物理特性分析：SEC-HPLC分析，DS-PAGE分析，DSC分析。

　　對(duì)于抗體人源化來說，人源化替換點(diǎn)可以說直接影響到CDR區(qū)構(gòu)象的關(guān)鍵，所以，需要引起高度的重視。否則，極有可能體驗(yàn)“一失足成千古恨”的感覺。普健生物為廣大用戶提供專業(yè)的抗體人源化服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。