蛋白表達(dá)中我們常用的方法主要有四種:大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)、桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)以及哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)。這四種表達(dá)方式各具特點(diǎn),當(dāng)然也各有不足之處,結(jié)合我們的需求,從中選擇最適合我們的表達(dá)方式。今天,普健生物在這里和大家具體聊聊昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)。
相對(duì)其他三種表達(dá)系統(tǒng)拉說(shuō),桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)具備安全性好、重組蛋白表達(dá)量高、蛋白修飾后翻譯完整且容易實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn),使得其在蛋白表達(dá)行業(yè)有著廣泛的應(yīng)用。昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)主要采用昆蟲(chóng)桿狀病毒為載體,同時(shí)采用昆蟲(chóng)細(xì)胞為載體來(lái)進(jìn)行蛋白表達(dá)。
但是昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)相比其他表達(dá)系統(tǒng)來(lái)說(shuō),蛋白表達(dá)量要低一些,那么,是否有其他辦法可以提升其表達(dá)水平呢?答案是肯定的。
方法一:抑制蛋白降解酶的產(chǎn)生
在采用病毒進(jìn)行蛋白表達(dá)時(shí),病毒本身就會(huì)產(chǎn)生蛋白酶,它會(huì)對(duì)重組蛋白進(jìn)行降解。這個(gè)時(shí)候,我們就需要對(duì)其進(jìn)行一些基因方面的調(diào)整個(gè),或者通過(guò)添加一些緩沖液,降低其降解速度;
方法二:調(diào)控目的基因轉(zhuǎn)錄
通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們了解到,多角體基因的下游序列一般都會(huì)對(duì)下游序列的外源基因表達(dá)產(chǎn)生影響。如果改變外源基因的終止密碼子,則會(huì)對(duì)目的基因的表達(dá)產(chǎn)生影響,所以,我們?cè)谶M(jìn)行目的基因表達(dá)的時(shí)候,可以增強(qiáng)其啟動(dòng)因子;
方法三:優(yōu)化啟動(dòng)子
在不同的啟動(dòng)子控制下,蛋白表達(dá)的水平存在著很大的差異。一般來(lái)說(shuō),P10啟動(dòng)子和堿性啟動(dòng)子的效果較好,其他啟動(dòng)子或多或少都存在著一些不足之處。所以,我們?cè)谶M(jìn)行蛋白表達(dá)的時(shí)候,可以?xún)?yōu)先考慮著兩種啟動(dòng)子;
方法四:使用活體昆蟲(chóng)表達(dá)蛋白
和昆蟲(chóng)培養(yǎng)不同,采用幼蟲(chóng)或蛹表達(dá)蛋白的水平能夠顯著提升,而且在很多實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)證明,采用幼蟲(chóng)能夠高效提升許多真核生物蛋白的制備;
當(dāng)然了,昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)也存在著一些不足之處,但是在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)卻也占據(jù)這重要的地位。而且隨著這一表達(dá)系統(tǒng)研究的不斷深入,其調(diào)理機(jī)制也變得愈發(fā)的清晰,相信在未來(lái),其使用將會(huì)變得更加的廣泛。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供蛋白表達(dá)服務(wù),四大表達(dá)方式,根據(jù)您的需求來(lái)選擇。