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采用真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)蛋白時(shí)如何做好蛋白純化?

發(fā)表時(shí)間:2023-02-02 訪問次數(shù):1895

  真核蛋白表達(dá)系統(tǒng)是我們比較常用的一種蛋白表達(dá)方式,它一般采用酵母、昆蟲、哺乳動(dòng)物來進(jìn)行表達(dá),所產(chǎn)生的蛋白和靶DNA具備高度的相似性,能夠誘導(dǎo)高效表達(dá)。但是其在實(shí)驗(yàn)過程中的可誘導(dǎo)性、生物利用率、劑量依賴性等方面有著較高的要求,所以,日常使用中需要權(quán)衡利弊后再來選擇。那么,在真核蛋白表達(dá)時(shí),我們?nèi)绾芜M(jìn)行蛋白純化呢?

  其實(shí)我們知道,無論是原核表達(dá)還是真核表達(dá)都需要進(jìn)行蛋白純化,這樣才能提升蛋白的作用效果,使其達(dá)到我們的使用需求。所以,蛋白純化,是蛋白表達(dá)過程中非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。

  天然大分子蛋白純化:

  通過蛋白特性,選擇合適孔徑的分子篩進(jìn)行純化,同時(shí)搭配陰離子柱或陽離子柱,可以獲得純度高達(dá)95%的蛋白;

  天然小分子分離純化:

  通過分子篩過濾掉大部分的大分子,然后再使用大孔樹脂或反向樹脂純化小分子化合物,再通過HPLC和MS對(duì)小分子肽進(jìn)行篩選即可;

  未知蛋白純化:

  結(jié)合客戶提供的蛋白特性,選擇相對(duì)應(yīng)的方法,最后采用質(zhì)譜鑒定,看是否滿足用戶的需求。一般來說,對(duì)于這種未知的蛋白質(zhì),我們所采用的方法也不外乎如上兩種,或者結(jié)合使用的方式;

  真核蛋白純化前客戶需要提供哪些支持?

  1、基因序列。為了更好地制備蛋白,客戶需要提供準(zhǔn)確的基因序列,并告知蛋白標(biāo)簽及相關(guān)要求,同時(shí)告知蛋白的用途(一般來說,制備的蛋白僅供研發(fā)使用,不適用于臨床使用);

  2、提供質(zhì)粒。客戶需提供質(zhì)粒,且量不小于100ng,同時(shí)提供序列文件;

  3、根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,蛋白序列、分子量、等電點(diǎn)等信息;

  真核蛋白表達(dá)系統(tǒng)雖然說獲得的蛋白特性更強(qiáng)、效果更好,但是相關(guān)投入以及技術(shù)需求就不是原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)所能比擬的。當(dāng)然了,在蛋白制備完成后,所用的蛋白純化方法較為類似,可以采用類似的方法。普健生物專業(yè)為您提供真核蛋白表達(dá)及蛋白純化服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。