哺乳動(dòng)物瞬時(shí)表達(dá)是一種將分子生物學(xué)與生物技術(shù)結(jié)合起來使用的一箱實(shí)驗(yàn)室技術(shù),通過將外源基因或蛋白引入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,而后通過哺乳動(dòng)物進(jìn)行表達(dá)的一種方式。這項(xiàng)技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)永久改變細(xì)胞基因組的情況,而后實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的表達(dá)。
哺乳動(dòng)物瞬時(shí)表達(dá)的工作原理是怎樣的?
1、載體構(gòu)建
我們知道,想要將DNA分子運(yùn)送到受體細(xì)胞中,則需要找一種能夠進(jìn)入細(xì)胞,且可以裝載外來DNA的片段,這個(gè)片段就是我們常說的載體。我們需要結(jié)合受體細(xì)胞的進(jìn)入條件,挑選合適的載體,并將目標(biāo)DNA裝載到載體上去;
2、細(xì)胞轉(zhuǎn)染
細(xì)胞轉(zhuǎn)染,顧名思義,其實(shí)就講外源分子DNA、RNA導(dǎo)入到細(xì)胞內(nèi)的過程。通常我們會(huì)選擇化學(xué)物質(zhì)介導(dǎo)法(主要有磷酸鈣共沉淀法、陽離子聚合物法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法)、物理物質(zhì)介導(dǎo)法(主要有電穿孔法、顯微注射以及基因槍)、生物物質(zhì)介導(dǎo)法(主要采用病毒介導(dǎo)法來實(shí)現(xiàn))等方法來實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染;
3、蛋白表達(dá)
一旦質(zhì)粒進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)后,細(xì)胞就會(huì)進(jìn)行相應(yīng)的蛋白表達(dá),當(dāng)然了,也會(huì)因?yàn)橐恍┰驅(qū)е缕湔喜坏剿拗骰蛑卸霈F(xiàn)表達(dá)失敗的情況。這個(gè)時(shí)候,我們就需要對其進(jìn)行多次操作,知道成功為止。而后,保證好相應(yīng)的表達(dá)環(huán)境,并及時(shí)環(huán)境變化因素,從而保證蛋白的持續(xù)表達(dá);
4、蛋白分析
通過對提起出來的蛋白進(jìn)行相關(guān)特異性以及穩(wěn)定性等方面的分析,確定其是否是我們所需,而后再對其進(jìn)行擴(kuò)大生產(chǎn);
哺乳動(dòng)物瞬時(shí)表達(dá)的優(yōu)勢有哪些?
1、能夠快速評估動(dòng)物細(xì)胞中蛋白的功能;
2、對短期研究有著非常大的好處;
3、使用更為廣泛,在研究、制藥、生物工程中有著廣泛的使用;
當(dāng)然了,因?yàn)槠髽I(yè)實(shí)力、技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)等方面的不同,使得每個(gè)企業(yè)哺乳動(dòng)物瞬時(shí)表達(dá)的順序有著一定的不同,但是,大體來說,都遵循這如上的步驟和方法,只是在細(xì)節(jié)方面有著一定的不同。但是,在表達(dá)量以及蛋白質(zhì)量方面則有著很大的區(qū)別。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白表達(dá)服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。