單B細(xì)胞技術(shù)是現(xiàn)階段單克隆抗體制備的主要方法,其保留了輕重鏈可變區(qū)的天然配對(duì),具備快捷、細(xì)胞數(shù)量少、高效等優(yōu)勢(shì)。單B細(xì)胞技術(shù)通過(guò)直接擴(kuò)增單B細(xì)胞的VH和VL編碼基因,從而生產(chǎn)出高質(zhì)量的單克隆抗體。那么,單B細(xì)胞技術(shù)的具體流程是怎樣的?
1、單個(gè)B細(xì)胞分離
從淋巴組織中分離出單B細(xì)胞,而后通過(guò)顯微操作、激光捕獲顯微切割以及熒光激活細(xì)胞分選等技術(shù),中挑選出具備特異性的細(xì)胞;
2、單B細(xì)胞抗體測(cè)序及克隆
通常我們會(huì)采用96孔板進(jìn)行單細(xì)胞的cDNA合成,而后通過(guò)相應(yīng)的技術(shù)手段對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增。而后將表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中,而后對(duì)單克隆抗體進(jìn)行體外表達(dá);
3、抗體表達(dá)及篩選
鑒定抗體片段的特異性和生物活性,而后將攜帶有目的抗體的表達(dá)載體在對(duì)應(yīng)的表達(dá)載體中進(jìn)行表達(dá)。
其實(shí)大家不難看出,單B細(xì)胞技術(shù)開(kāi)發(fā)和雜交瘤細(xì)胞抗體表達(dá)有著很多相似之處,只是在細(xì)胞制備最初階段有著一定的區(qū)別,之后的過(guò)程都非常的類(lèi)似。作為現(xiàn)階段能夠制備高質(zhì)量單克隆抗體的熱門(mén)方式,單B細(xì)胞技術(shù)將會(huì)得到進(jìn)一步的開(kāi)發(fā),活得更好的制備方式。普健生物專(zhuān)業(yè)為您提供單B細(xì)胞單克隆抗體制備服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來(lái)電咨詢(xún)。