穩(wěn)定細(xì)胞系也叫穩(wěn)定細(xì)胞表達(dá)系，是一種通過將目標(biāo)基因整合到宿主細(xì)胞中后傳代，保證細(xì)胞可以穩(wěn)定表達(dá)的一種細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。就目前來說，穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建的方法主要有三種：慢病毒感染細(xì)胞、轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建以及基因敲入法。今天，普健生物就和大家具體聊聊這三種穩(wěn)定細(xì)胞系的構(gòu)建方法以及相應(yīng)問題解析。

　　1、慢病毒感染

　　我們知道，慢病毒技術(shù)可以感染絕大多數(shù)的細(xì)胞，而且病毒包裝技術(shù)也是非常的成熟，可以說是穩(wěn)定細(xì)胞系的首選系統(tǒng)。當(dāng)然了，慢病毒技術(shù)也有著一定的不足之處，比如慢病毒包裝容量有限制，對(duì)于那些轉(zhuǎn)錄區(qū)域較長的基因來說，其有著極大的局限性。而且慢病毒為逆轉(zhuǎn)錄病毒，對(duì)于部分的基因翻譯有著一定的影響;

　　2、轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建

　　也叫跳躍基因，通過剪切和粘貼來實(shí)現(xiàn)DNA片段的高效轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)座子其實(shí)就是通過編碼轉(zhuǎn)座酶，將轉(zhuǎn)座酶基因在基因序列上進(jìn)行整合;

　　3、基因敲入

　　采用基因技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行定點(diǎn)敲入，依靠細(xì)胞自身的修復(fù)機(jī)制完成;

　　穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建中的常見問題：

　　1、穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建需要進(jìn)行密碼子優(yōu)化嗎?

　　對(duì)于不同的基因序列來說，因?yàn)槠涿艽a子的簡易性以及種類、數(shù)量上面的察覺，想要構(gòu)建的穩(wěn)定細(xì)胞系長期穩(wěn)定的表達(dá)，密碼子優(yōu)化是非常必要的;

　　2、如何選擇合適的啟動(dòng)子?

　　對(duì)于不同的制備需求，我們需要設(shè)定特定的啟動(dòng)子。比如CMV啟動(dòng)子除了在干細(xì)胞外，其他大多數(shù)細(xì)胞類型中都可以得到較高活性表達(dá);懸浮細(xì)胞中采用SFFV啟動(dòng)子會(huì)獲得更高的表達(dá)活性等;

　　當(dāng)然了，對(duì)于穩(wěn)定表達(dá)系的構(gòu)建來說，會(huì)遇到的問題非常的多，很多時(shí)候，即便我們嚴(yán)格按照制備方式來執(zhí)行也依然可能會(huì)出現(xiàn)問題。因?yàn)?，?duì)于大部分的人來說，穩(wěn)定細(xì)胞系的構(gòu)建本就是一個(gè)龐大的過程，任何一個(gè)小問題都可能造成構(gòu)建的失敗。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。