納米抗體（nanobody， Nb）在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、循環(huán)系統(tǒng)疾病、感染性疾病、腫瘤學和炎癥性疾病中均表現(xiàn)出優(yōu)異的應(yīng)用價值和前景，主要聚焦于腫瘤治療且已經(jīng)取得了顯著成效，納米抗體-藥物偶聯(lián)、CAR-T、光動力療法(PDT)、靶向放射性核素治療等治療方法的不斷研發(fā)改進為患者帶來了新的希望。

靶向腫瘤的納米抗體

Altintas等研發(fā)了一種核心由EGFR靶向納米抗體（nanobody， Nb）與PEG (EGa1-PEG) 結(jié)合的納米粒子(NANAP)，NANAP中裝載有多激酶抑制劑17864，在溶酶體吸收和消化后，激酶抑制劑在細胞內(nèi)釋放，抑制EGFR陽性的14C鱗狀頭頸癌細胞的生長。Fang等將藥物美登素(DM1) 與MHC-Ⅱ靶向納米抗體VHH7結(jié)合，通過NIR成像及向健康小鼠和荷瘤小鼠注射VHH7-AF47，解剖后比較熒光信號證實了淋巴瘤在肺、肝、脾、淋巴結(jié)等器官中的存在且肝臟中有轉(zhuǎn)移灶，腫瘤浸潤導(dǎo)致脾腫大，并證實了VHH7對轉(zhuǎn)移灶的靶向性，用A20細胞系作為模型，VHH7-DM1治療組腫瘤明顯小于對照組，小鼠平均存活時間長于對照組，可顯著抑制肝臟病灶轉(zhuǎn)移。CD7分子黏附抗體或抗體衍生物后可快速發(fā)生內(nèi)吞作用。Tang等以單價和雙價抗-CD7納米抗體為基礎(chǔ)構(gòu)建了免疫毒素，并將其編碼為PG001和PG002，采用WST-8法測定細胞毒活性，兩者分別在納摩爾(PG001) 和皮摩爾(PG002) 濃度下能誘導(dǎo)T-ALL細胞系的高效抗原特異性凋亡，能有效、選擇性地殺傷人白血病細胞，顯著延長治療后小鼠的存活時間。

放射性標記的納米抗體（nanobody， Nb）也有望成為靶向放射性核素治療的靶向藥物。其中α粒放射性核素正在用于臨床或臨床前評估，2Rs15d是一個HER-2特異性納米抗體（nanobody， Nb），Pruszynski等利用2Rs15d納米抗體（nanobody， Nb）與偶聯(lián)劑2-(4-異硫氰基芐基)-1, 4, 7, 10-四氮雜環(huán)十二烷-1, 4, 7, 10-四乙酸(p-SCN-Bn-DOTA)，并用α發(fā)射性核素錒-225標記(α-225Ac)，產(chǎn)生225Ac-DOTA-Nb，這種靶向納米抗體（nanobody， Nb）可以為靶細胞提供高致死性和局部化的放射治療。

納米抗體（nanobody， Nb）可充當光敏劑(photosensitizer, PS) 的載體，用于靶向光動力療法(photodynamic therapy, PDT)，通常臨床上使用疏水的光敏劑，不能提供腫瘤特異性。增加腫瘤細胞特異性受體的表達水平可以用于靶向這些細胞，即增加腫瘤對光敏劑的特異性攝取，如過度表達的EGFR等常被用作靶向治療的靶點。采用納米抗體（nanobody， Nb）的PDT可將周圍細胞的損害降低，納米抗體-PS共軛物選擇性地結(jié)合到靶標上，并且在照明后能夠在體外誘導(dǎo)選擇性地殺死腫瘤細胞。

用于病毒感染的納米抗體
納米抗體（nanobody， Nb）還是中和抗病毒試劑的豐富來源，可作為治療動、植物病毒感染的理想工具。SARS-冠狀病毒-2 (SARS-CoV-2) 的出現(xiàn)導(dǎo)致了一種全球性的流行病，比以往的冠狀病毒傳播性更強，不同的納米抗體（nanobody， Nb）已經(jīng)被開發(fā)用于高親和力結(jié)合受體結(jié)合域(RBD)，競爭性地抑制RBD與人血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2 (ACE2) 的相互作用并中和病毒[65-67]，納米抗體（nanobody， Nb）主要依賴于3個可變環(huán)，即圖CDR1、CDR2、CDR3形成的抗原結(jié)合位點，納米抗體（nanobody， Nb）相關(guān)技術(shù)的成熟揭示其可作為高效的中和劑，抵御致病性冠狀病毒的侵襲。
普健生物構(gòu)建了千億級納米抗體VHH文庫，淘選了針對新冠NTD domain的納米抗體（nanobody， Nb），獲得了9條VHH序列，并采用哺乳系統(tǒng)進行了9條VHH-Fc的重組表達，9條VHH-Fc序列的表達量均較高。

Strokappe等成功構(gòu)建了靶向HIV gp41和gp120包膜蛋白的中和性納米抗體，這些新的雙特異性VHH有成為治療劑或殺菌劑的潛力。BBMV是一種種子傳播的植物病毒，Ghannam等通過噬菌體展示生物淘選分離出8個BBMV特異性納米抗體，其中3個成功地抑制了BBMV在體外的傳播且在蠶豆中表達時能中和BBMV。Orlov等分離出抑制葡萄扇葉病毒(grapevine fanleaf virus, GFLV) 的納米抗體Nb23，在煙草和該病毒的天然宿主葡萄砧木中穩(wěn)定表達并觀察到了對GFLV強烈的特異性抵抗力。

用于抗菌素的納米抗體
抗生素療法是治療細菌性感染的主要手段，但由于抗生素不合理、過度的使用，導(dǎo)致耐藥菌甚至超級細菌的出現(xiàn)，對于嚴重感染的病例，抗生素已經(jīng)無法發(fā)揮其抗菌抑菌的作用。
而納米抗體（nanobody， Nb）由于特異性強，能精確結(jié)合致病細菌表面抗原，拮抗細菌對宿主細胞的黏附，從而治療由細菌引起的感染性疾病，成為開發(fā)抗菌治療的新方式。納米抗體（nanobody， Nb）通過拮抗細菌黏附、運動以及細菌毒力因子等不同方式對抗細菌感染，減少致病菌黏附，如通過選擇能夠抑制細菌在上皮細胞粘附的抗表面抗原的VHH，可用于預(yù)防菌源性腹瀉。此外，納米抗體（nanobody， Nb）還可以防止細菌或細菌毒素進入細胞，如VHH R303與內(nèi)化蛋白B (internalin B, Inl B) 上c-Met作用位點結(jié)合，能競爭性地抑制李斯特菌入侵赫拉細胞，進一步研究結(jié)果表明其可用于治療和預(yù)防李斯特菌病。

作為解毒劑的納米抗體
在許多國家，蛇、蝎子、蜘蛛等的毒液嚴重危害人類健康。研究表明，納米抗體（nanobody， Nb）具有良好的中和能力，Jinkins等成功分離出對α-眼鏡蛇毒素(α-Cbtx) 具有很高親和力的VHHs (C2和C20)，它們能夠完全中和α-Cbtx的致死作用。Calderon等開發(fā)了一套針對黃腭蛇毒出血性和肌毒成分的納米抗體（nanobody， Nb），通過小鼠實驗確定了Nbs H6、H8和H9具有最好的蛇毒出血作用中和活性，Nbs M28、M35、M43、M67、M85和M88可作為較好的肌毒作用抑制劑。Ahmadi等總結(jié)了幾種蝎子毒液治療的抗毒劑，與傳統(tǒng)抗毒劑相比，納米抗體因其具有較高的體外穩(wěn)定性和低的免疫原性，具有發(fā)展為下一代蝎子抗毒血清的潛力，如有研究表明anti-HNc納米抗體（nanobody， Nb）能夠?qū)Χ拘?/font>HNc類毒素的侵害提供完全的保護，一種雙特異性NbF12-10展現(xiàn)了出色的毒液中和能力，對致命的蝎子蜇傷也能提供全面保護。因此，未來納米抗體（nanobody， Nb）可作為解毒劑以提供安全有效的治療方法。

普健生物擁有自建養(yǎng)殖基地，每年近百頭成年羊駝用于免疫，穩(wěn)定提供大量的免疫抗原。擁有近千億級別天然庫，最快在2周內(nèi)可完成針對各類靶點的特異性納米抗體快速篩選，抗體親和力可達10-9M 級別，插入正確率100%，序列正確率97%，隨機選取200個克隆測序，均無重復(fù)序列；并且免疫庫源自百余只不同種類的駝類樣本-羊駝（Alpaca ）、駱駝（Camel）、美洲駝（Llama），提供更高抗體多樣性以構(gòu)建免疫庫，獲得更高親和力VHH序列。

隨著研究的不斷深入，納米抗體（nanobody， Nb）優(yōu)越的特性也將會在更多領(lǐng)域展現(xiàn)其應(yīng)用價值，其高穩(wěn)定性或可使其在醫(yī)學和臨床應(yīng)用中發(fā)揮作用，如解決疫苗或抗體藥物研發(fā)中存在的療效、安全性、費用等一系列問題及抗生素耐藥性的問題，或能實現(xiàn)多途徑給藥等。我們期待未來納米抗體（nanobody， Nb）更多引人注目的研究成果的問世。

參考文獻：
SUN S, TAN X, PANG XY, LI M, HAO XJ. Recent advances in the application of nanobody technology: a review. Chinese Journal of Biotechnology, 2022, 38(3): 855-867.