2021年06月19日蘇州系統(tǒng)醫(yī)學(xué)研究所程根宏課題組和普健生物(武漢)科技有限公司、十堰市太和醫(yī)院以及蘇州方科生物有限公司合作在Small Methods雜志在線發(fā)表了《Methods to Identify Immunogenic Peptides in SARS-CoV-2 Spike and Protective Monoclonal Antibodies in COVID-19 Patients》研究成果。該論文發(fā)現(xiàn)了一種COV2病毒免疫原性表位和抗體篩選的新方法。

　　中和抗體通過與COV2病毒的S蛋白結(jié)合，可以有效阻止COV2病毒感染細(xì)胞。它們既可以用于治療感染COV2病毒的患者，也能夠作為預(yù)防性療法，給易感高危人群提供被動(dòng)免疫能力。目前雖然已有SARS-CoV-2的中和抗體被開發(fā)為治療藥物，但對(duì)于能診斷COV2病毒以及產(chǎn)生中和抗體的免疫原性表位尚未清楚。

　　該研究團(tuán)隊(duì)首先構(gòu)建表達(dá)含25個(gè)氨基酸的多肽噬菌體文庫，這些多肽覆蓋COV2病毒Spike全長(zhǎng)蛋白，將該噬菌體文庫與7名COV2患者和一個(gè)具有與其同源性表位結(jié)合抗體健康個(gè)體的血清混合，再通過Protein A/G磁珠富集與抗體結(jié)合的噬菌體文庫，進(jìn)行PCR擴(kuò)增及測(cè)序。最終分析得到3個(gè)位于RBM區(qū)的S430-451，S470-481和S501-515特異性較好的表位。

　　通過對(duì)不同患者血清中的抗體分布情況以及抗體水平與臨床狀態(tài)的關(guān)系研究后，發(fā)現(xiàn)對(duì)于COVID-19的中和活性可能是由于針對(duì)多種表位的抗體組合而成的。再用這3種多肽分別免疫小鼠刺激產(chǎn)生相應(yīng)抗體后檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，其中S470-486具有較高的免疫原性，產(chǎn)生的中和抗體能抑制COV2病毒的感染。

　　為進(jìn)一步證明S470-486肽上的抗原表位是否能識(shí)別COV2病毒感染患者體內(nèi)的中和抗體，從15個(gè)COV2患者PBMC中得到抗體的VH和VL，構(gòu)建出了 ScFv抗體表達(dá)噬菌體文庫，以生物素標(biāo)記的S470-486多肽為誘餌經(jīng)過3輪淘選富集，從庫容量為8.7x109的ScFv文庫中得到了兩株單克隆抗體(R3P1-F8和R3P2-A9-3)，再將其構(gòu)建到含有人IgG1主鏈的表達(dá)載體上。

　　最后通過ELISA分析證實(shí)了全長(zhǎng)的R3P1-F8和R3P2-A9-3與S470-486多肽的結(jié)合能力。

　　其中R3P2-A9-3能有效地阻斷SARS-CoV-2假病毒和野生型病毒的感染。

　　該研究不僅發(fā)現(xiàn)了新的COV2病毒抗原表位和中和抗體，也建立了一種有效的COV2病毒抗原表位和中和抗體篩選的方法。

　　綜上所述，我們可以看到噬菌體展示技術(shù)顛覆了傳統(tǒng)的雜交瘤方法從而在短時(shí)間獲得全人重組抗體，為全人重組抗體提供了一條簡(jiǎn)便、快捷的基因工程抗體制備路線，是全人重組抗體制備發(fā)展史上重要的轉(zhuǎn)折點(diǎn)，未來在抗體藥物的研發(fā)和生產(chǎn)中會(huì)愈發(fā)地受到重視。當(dāng)然，關(guān)于該方法的篩選效率、安全性和臨床應(yīng)用的潛力還要更多的研究去驗(yàn)證。

　　本項(xiàng)研究工作中噬菌體文庫的構(gòu)建、淘選、重組抗體表達(dá)純化均由普健生物完成。普健生物具有千億級(jí)全人重組抗體庫和近千億級(jí)天然納米抗體庫，可以為您提供最專業(yè)的噬菌體展示技術(shù)服務(wù)。