在雜交瘤細胞制備的過程中,雖然篩選出來的雜交瘤細胞能夠通過冷凍保存,但是依然存在細胞失活的風險。所以,為了克服雜交瘤細胞保存的問題,我們常常會選擇對雜交瘤細胞進行測序,能夠快速且準確地進行后期的抗體制備。今天,普健生物和大家具體聊聊有關雜交瘤細胞測序的具體步驟和應用。
雜交瘤細胞測序的具體步驟:
1、雜交瘤細胞培養(yǎng)。先取出雜交瘤細胞進行復蘇,然后在37度的環(huán)境下培養(yǎng)10天,至細胞生長旺盛時再收集細胞;
2、mRNA提取。裂解細胞后加入氯仿,離心15分鐘后提取上清液。取上清液并加入異丙醇離心10分鐘,取沉淀洗凈,晾干后加入適量DEPC溶解;
3、轉(zhuǎn)率cDNA。選擇合適的反應體系進行擴增,合成cDNA第一條鏈,而后根據(jù)已知的cDNA合成第二條鏈;
4、獲得可變區(qū)基因。對cDNA進行擴增,獲得輕鏈/重鏈可變區(qū)基因;
5、抗體測序。對基因進行陽性克隆并測序;
6、分析測序結果。通過生物信息學分析,得到抗體序列;
雜交瘤細胞測序的優(yōu)勢:
雜交瘤測序可以更為準確地進行質(zhì)譜分析,能夠提供更加準確且可靠的結果;
雜交瘤細胞測序的應用:
1、用于進行相關基因測序的專利性保護;
2、用于保存測序信息,防止雜交瘤細胞丟失單抗信息;
3、用于表達純度更高的重組單克隆抗體;
4、縮短雜交瘤細胞克隆的耗時過程,加速單克隆抗體生產(chǎn);
5、提升單抗親和力;
6、構建嵌合抗體以及抗體人源化;
雜交瘤抗體測序能夠帶來的好處是毋庸置疑的,不僅能夠有效降低抗體制備的批次性差異問題,更是能夠在極大程度上提升抗體的親和力。當然了,測序的過程相對來說要復雜一些,需要一定的技術支持。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供雜交瘤抗體測序服務,如果您有相關需求,歡迎來電咨詢。