
作為靶向特異性抗體的來源,兔比小鼠具有獨(dú)特的優(yōu)勢。它們產(chǎn)生的親和力抗體高于小鼠,并可能針對小鼠免疫原性差或耐受差的抗原或表位引發(fā)強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。然而,由于小鼠融合伙伴細(xì)胞系的廣泛應(yīng)用,以及成熟的融合和克隆小鼠雜交瘤的工具和方案,目前絕大多數(shù)單克隆抗體來源于小鼠。噬菌體展示技術(shù)篩選抗體庫是一種替代雜交瘤技術(shù)制備特異性單克隆抗體的方法。利用免疫動(dòng)物的B細(xì)胞構(gòu)建抗體文庫,通過噬菌體展示技術(shù)對抗體文庫進(jìn)行篩選,可以獲得高親和力的非鼠源單克隆抗體。

基于噬菌體展示技術(shù)的兔免疫Fab庫的建立,可以方便地分離兔單克隆抗體。免疫后,從動(dòng)物脾臟中提取B細(xì)胞cDNA,通過PCR擴(kuò)增抗體可變域庫并組裝成Fab庫。然后將Fab基因克隆到噬菌體載體并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌,完成兔免疫Fab基因文庫的構(gòu)建。該文庫可針對免疫抗原進(jìn)行生物篩選,用于快速鑒定高親和力、靶向特異性的兔單克隆抗體。
抗體庫是編碼特性未知抗體的抗體基因的巨大集合(通常大于1010)。抗體庫是通過噬菌體展示和其他體外選擇技術(shù)來發(fā)現(xiàn)抗體的重要來源,其設(shè)計(jì)是成功發(fā)現(xiàn)抗體的關(guān)鍵。抗體庫的類型包括隨機(jī)肽庫、免疫庫和天然庫。
隨機(jī)肽庫:將化學(xué)合成的隨機(jī)寡核苷酸序列與噬菌體的表面蛋白基因融合,在噬菌體表面表達(dá)出各種氨基酸組合的隨機(jī)序列短肽。利用噬菌體展示隨機(jī)肽庫可以高通量篩選各種抗原的抗原表位
免疫庫:免疫庫由經(jīng)過免疫(包括疫苗注射、微生物感染、自身免疫疾病、腫瘤等)后的供體B淋巴細(xì)胞的抗體基因構(gòu)建。對于特定免疫抗原的抗體淘選的效率較高,但一般僅適用于一種特異性抗體的選擇,庫容量要求不高,一般106-108的庫容量就可滿足需要
天然庫:采用不經(jīng)免疫的人或動(dòng)物來源的外周血淋巴細(xì)胞、骨髓、脾細(xì)胞的B細(xì)胞作為材料,進(jìn)行基因擴(kuò)增,但親和力通常較低。骨髓內(nèi)和骨髓外所有抗體基因都包含在內(nèi),所構(gòu)建的抗體庫適用于所有抗原所對應(yīng)的抗體的選擇,庫容量要求較高,最小需要達(dá)到 109,因?yàn)槟壳肮浪愕淖匀唤绲目乖N類在這個(gè)數(shù)量級上
普健生物構(gòu)建了千億級別、高親和力全人源重組天然抗體文庫,經(jīng)過驗(yàn)證,任意靶點(diǎn)從文庫中直接篩選,一般可以獲得十幾個(gè)到上百個(gè)高親和力的克隆,其親和力、特異性都達(dá)到行業(yè)領(lǐng)先水平。
優(yōu)勢:
1.序列正確性高,現(xiàn)階段庫容已達(dá)近千億級別(1011pfu)。
2.兩步法建庫,先連入輕鏈再連入重鏈,將來自全世界不同地區(qū)人種來源的輕鏈和重鏈隨機(jī)組合,保證了庫的高質(zhì)量和多樣性。
3.分為κ和λ兩種輕鏈亞型的單鏈抗體庫,與大多數(shù)商業(yè)化混合庫不同,即可用于篩選κ型抗體,也可用于篩選λ型的高親和力抗體。
4.帶有His標(biāo)簽,可直接用phagemid表達(dá)抗體,His標(biāo)簽純化
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