在我們進(jìn)行真核細(xì)胞蛋白表達(dá)時(shí)，真核細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)必不可少的過(guò)程，就和雜交瘤細(xì)胞蛋白表達(dá)中的雜交瘤細(xì)胞融合一樣，它從根本上制約著真核蛋白表達(dá)的成功與否。然而，和蛋白表達(dá)一樣，我們?cè)谶M(jìn)行真核細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，也常常會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題。有鑒于此，普健生物在這里和大家聊聊有關(guān)真核細(xì)胞培養(yǎng)中的幾個(gè)常見問(wèn)題，以及遇到這些問(wèn)題時(shí)的解決方案。

　　1、細(xì)胞不貼壁

　　在培養(yǎng)過(guò)程中，如果細(xì)胞不貼壁，一般來(lái)說(shuō)造成這個(gè)現(xiàn)象的原因主要有三種：胰蛋白酶消化過(guò)度、支原體污染以及培養(yǎng)液中缺乏貼壁因子。這個(gè)時(shí)候，我們可以考慮通過(guò)降低胰蛋白酶濃度、分離培養(yǎng)物以及清潔支架的方式來(lái)解決問(wèn)題。當(dāng)然了，如果通過(guò)如上幾個(gè)方式依然沒有解決，那么，我們需要結(jié)合培養(yǎng)過(guò)程進(jìn)行分析對(duì)比，找出其問(wèn)題所在;

　　2、PH值變化快

　　培養(yǎng)液中PH值變化過(guò)快的原因相對(duì)較多，比如緩沖系統(tǒng)緩沖力不夠、培養(yǎng)液鹽濃度不正確、培養(yǎng)液污染、二氧化碳張力不夠等等，當(dāng)出現(xiàn)這個(gè)問(wèn)題時(shí)，我們可以適當(dāng)減少培養(yǎng)液中二氧化碳的含量，或者改用不依賴二氧化碳的培養(yǎng)液，并保證培養(yǎng)液的純度，減少其污染來(lái)解決;

　　3、細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢

　　在預(yù)定時(shí)間內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)量不足，細(xì)胞存在生長(zhǎng)緩慢的情況。其原因主要是培養(yǎng)液選擇不對(duì)、相關(guān)試劑保存不當(dāng)以及培養(yǎng)液被污染(少量細(xì)菌或真菌感染)。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)緩慢時(shí)，我們可以考慮更換培養(yǎng)液成分、增加原始細(xì)胞濃度、補(bǔ)加谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子以及加入抗生素等方式來(lái)進(jìn)行解決;

　　4、細(xì)胞死亡

　　培養(yǎng)一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞直接死亡，這個(gè)現(xiàn)象發(fā)生的主要原因是培養(yǎng)箱內(nèi)缺二氧化碳、箱內(nèi)溫度變化大、細(xì)胞損傷或死亡、培養(yǎng)過(guò)程中代謝物堆積等，這個(gè)時(shí)候，我們需要定時(shí)檢測(cè)箱內(nèi)二氧化碳含量、控制好箱內(nèi)溫度、實(shí)驗(yàn)前檢測(cè)好細(xì)胞活性，并檢測(cè)培養(yǎng)液的滲透壓，這樣才能在更大程度上避免細(xì)胞的死亡;

　　當(dāng)然了，細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需要面臨的問(wèn)題還有很多，只有將這些方面都好了后，才能在更大程度上保證細(xì)胞的培養(yǎng)。對(duì)于真核細(xì)胞表達(dá)來(lái)說(shuō)，只有活性好、質(zhì)量高的細(xì)胞才能在更大程度上滿足我們后期有關(guān)蛋白制備的需求。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供真核蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢。