在我們進(jìn)行真核細(xì)胞蛋白表達(dá)時(shí),真核細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)必不可少的過(guò)程,就和雜交瘤細(xì)胞蛋白表達(dá)中的雜交瘤細(xì)胞融合一樣,它從根本上制約著真核蛋白表達(dá)的成功與否。然而,和蛋白表達(dá)一樣,我們?cè)谶M(jìn)行真核細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中,也常常會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題。有鑒于此,普健生物在這里和大家聊聊有關(guān)真核細(xì)胞培養(yǎng)中的幾個(gè)常見問(wèn)題,以及遇到這些問(wèn)題時(shí)的解決方案。
1、細(xì)胞不貼壁
在培養(yǎng)過(guò)程中,如果細(xì)胞不貼壁,一般來(lái)說(shuō)造成這個(gè)現(xiàn)象的原因主要有三種:胰蛋白酶消化過(guò)度、支原體污染以及培養(yǎng)液中缺乏貼壁因子。這個(gè)時(shí)候,我們可以考慮通過(guò)降低胰蛋白酶濃度、分離培養(yǎng)物以及清潔支架的方式來(lái)解決問(wèn)題。當(dāng)然了,如果通過(guò)如上幾個(gè)方式依然沒有解決,那么,我們需要結(jié)合培養(yǎng)過(guò)程進(jìn)行分析對(duì)比,找出其問(wèn)題所在;
2、PH值變化快
培養(yǎng)液中PH值變化過(guò)快的原因相對(duì)較多,比如緩沖系統(tǒng)緩沖力不夠、培養(yǎng)液鹽濃度不正確、培養(yǎng)液污染、二氧化碳張力不夠等等,當(dāng)出現(xiàn)這個(gè)問(wèn)題時(shí),我們可以適當(dāng)減少培養(yǎng)液中二氧化碳的含量,或者改用不依賴二氧化碳的培養(yǎng)液,并保證培養(yǎng)液的純度,減少其污染來(lái)解決;
3、細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢
在預(yù)定時(shí)間內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)量不足,細(xì)胞存在生長(zhǎng)緩慢的情況。其原因主要是培養(yǎng)液選擇不對(duì)、相關(guān)試劑保存不當(dāng)以及培養(yǎng)液被污染(少量細(xì)菌或真菌感染)。當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)緩慢時(shí),我們可以考慮更換培養(yǎng)液成分、增加原始細(xì)胞濃度、補(bǔ)加谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子以及加入抗生素等方式來(lái)進(jìn)行解決;
4、細(xì)胞死亡
培養(yǎng)一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞直接死亡,這個(gè)現(xiàn)象發(fā)生的主要原因是培養(yǎng)箱內(nèi)缺二氧化碳、箱內(nèi)溫度變化大、細(xì)胞損傷或死亡、培養(yǎng)過(guò)程中代謝物堆積等,這個(gè)時(shí)候,我們需要定時(shí)檢測(cè)箱內(nèi)二氧化碳含量、控制好箱內(nèi)溫度、實(shí)驗(yàn)前檢測(cè)好細(xì)胞活性,并檢測(cè)培養(yǎng)液的滲透壓,這樣才能在更大程度上避免細(xì)胞的死亡;
當(dāng)然了,細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需要面臨的問(wèn)題還有很多,只有將這些方面都好了后,才能在更大程度上保證細(xì)胞的培養(yǎng)。對(duì)于真核細(xì)胞表達(dá)來(lái)說(shuō),只有活性好、質(zhì)量高的細(xì)胞才能在更大程度上滿足我們后期有關(guān)蛋白制備的需求。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供真核蛋白表達(dá)服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來(lái)電咨詢。