在生物技術(shù)發(fā)展的今天，蛋白表達(dá)在科學(xué)研究以及臨床治療中起著非常重要的作用。而在基因技術(shù)發(fā)展的今天，蛋白的需求日益增加，大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)因?yàn)槠溥z傳背景清晰、成本低以及生長(zhǎng)迅速的優(yōu)勢(shì)，使得其成為重組蛋白表達(dá)的首選。

　　什么是高通量蛋白表達(dá)技術(shù)?

　　高通量蛋白表達(dá)技術(shù)其實(shí)就是一種能夠?qū)崿F(xiàn)大規(guī)模、高效的制備蛋白的技術(shù)，可以通過(guò)不同的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的表達(dá)。

　　高通量蛋白表達(dá)的步驟有哪些?

　　1、目的基因制備

　　作為蛋白表達(dá)，基因制備是第一步。目的基因的提取方法有很多，傳統(tǒng)的方法主要是通過(guò)從cDNA文庫(kù)中提取。但是，這種方法存在一定的局限性，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且難以添加融合標(biāo)簽?，F(xiàn)階段常用的方法主要采用PCR技術(shù)，設(shè)計(jì)好引物后，即可在PCR儀中完成目的基因的提取;

　　2、高通量表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建

　　和傳統(tǒng)的蛋白表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建相似，高通量蛋白表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建沒(méi)有特別大的改動(dòng)，只是說(shuō)在一些細(xì)節(jié)方面有著一定的不同。比如在目的基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)之前需要添加融合標(biāo)簽，以便于提升其表達(dá)效率;

　　3、菌株培養(yǎng)

　　在表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建成功后(一般來(lái)說(shuō)，我們會(huì)選擇大腸桿菌菌株來(lái)進(jìn)行表達(dá))，而后選擇出合適的菌株。當(dāng)然了，對(duì)于大腸桿菌的培養(yǎng)來(lái)說(shuō)，我們盡量選擇分批培養(yǎng)，這樣才更加有利于菌株的控制;

　　4、高通量蛋白表達(dá)及純化

　　采用高通量的平臺(tái)，能夠?qū)崿F(xiàn)迅速地進(jìn)行基因克隆、挑選菌落、質(zhì)粒分離、蛋白表達(dá)以及蛋白純化等操作。當(dāng)然了，雖然說(shuō)這個(gè)平臺(tái)的構(gòu)建相對(duì)困難，但是，對(duì)于那些復(fù)雜的分子實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)，往往能提供極大的便利;

　　采用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)來(lái)實(shí)現(xiàn)高通量重組蛋白的表達(dá)，能夠在極大程度上推進(jìn)蛋白的表達(dá)進(jìn)程。雖然說(shuō)在其技術(shù)水平上有著一定的要求，但是隨著技術(shù)的不斷優(yōu)化和創(chuàng)新，能夠讓其更加高效且可靠的進(jìn)行蛋白表達(dá)。