在納米抗體制備過(guò)程中,羊駝免疫可以說(shuō)是制備的起點(diǎn),只有這個(gè)過(guò)程進(jìn)行得順利,后續(xù)的實(shí)驗(yàn)才能夠得以進(jìn)行。那么,羊駝免疫的具體過(guò)程您知道嗎?今天,普健生物就在這里和大家一一介紹。
1、抗原準(zhǔn)備。一般來(lái)說(shuō),一只羊駝可以同時(shí)免疫1-3個(gè)抗原,劑量保持在1-2mg之間,在免疫前,我們需要將抗原與佐劑以1:1的比例進(jìn)行混合,并在4度環(huán)境下保持一段時(shí)間;
2、免疫羊駝。記錄羊駝耳號(hào),而后從羊駝?lì)i部靜脈2點(diǎn)注射,每點(diǎn)注射0.4mL混合液。觀察半小時(shí)后,如果羊駝狀態(tài)良好,則每2周再免疫一次;
3、采血。4次免疫后,每隔5-7天采血一次,每次50mL;
4、血清分離。每次采血都從其中抽取5mL血液進(jìn)行預(yù)冷,而后在25度環(huán)境下進(jìn)行離心,30分鐘后去其上層血清用于抗體效果評(píng)價(jià);
5、淋巴細(xì)胞提取。在離心管中加入分離液,然后以1:1的比例加入血液(注:注入血液時(shí)要緩慢注入,防止血液與分離液混合),之后離心30分鐘,而后將上層血清保存到新的離心管中,-80度保存。取出其中棉狀免疫細(xì)胞至新的理線管中,加入PBS緩沖液,25度下離心20分鐘,去除上清液,根據(jù)細(xì)胞數(shù)目溶解分離出淋巴細(xì)胞溶液,-80度保存;
關(guān)于免疫中需要注意的一些事項(xiàng):
1、羊駝和抗原的選擇直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗,所以,我們盡量要選擇健康強(qiáng)壯狀態(tài)良好的羊駝,并選擇合適純度的免疫抗原;
2、淋巴液需要及時(shí)分離提取,這樣才能在更大程度上防止溶血情況的出現(xiàn);
3、免疫周期也可能會(huì)影響到免疫效果,一般1-2周間隔免疫最好;
總的來(lái)說(shuō),羊駝免疫過(guò)程中需要注意到的事項(xiàng)很多,但是如果我們按照實(shí)驗(yàn)規(guī)范嚴(yán)格操作的話,就能有效提升實(shí)驗(yàn)的成功率。對(duì)于大部分的客戶(hù)來(lái)說(shuō),自己免疫的成功率和成本投入量是非常高的,這個(gè)時(shí)候我們就可以考慮直接購(gòu)買(mǎi)納米抗體的方式,所得的納米抗體無(wú)論是質(zhì)量上還是純度上都能夠達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。更多納米抗體制備知識(shí),盡在普健生物。