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單克隆抗體制備之雜交瘤細(xì)胞篩選的原理

發(fā)表時(shí)間:2022-11-16 訪問次數(shù):2115

  在單克隆抗體制備的過程中,雜交瘤細(xì)胞的制備可謂重中之重,它的重要性自然不言而喻。但是,雜交瘤細(xì)胞的篩選則關(guān)系到我們產(chǎn)生蛋白的質(zhì)量以及相關(guān)成本問題。在單克隆抗體制備的過程中,我們需要進(jìn)行兩次雜交瘤細(xì)胞的篩選,方法各不相同。下面,普健生物就和大家具體聊聊。

  第一次篩選:

  淋巴B細(xì)胞和骨髓細(xì)胞融合后即產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞,之后的選擇性培養(yǎng)可謂第一次篩選成功與否的關(guān)鍵。一般我們會(huì)選擇HAT培養(yǎng)液進(jìn)行普通細(xì)胞的培養(yǎng),一般采用兩條途徑:

  1、生物合成途徑(D途徑)。通過氨基酸和其他小分子融合成的原料來供應(yīng)DNA分子的合成,其中也算作為輔酶參與這個(gè)過程,氨基蝶呤則會(huì)阻斷DNA合成,這個(gè)過程也就是我們常說的D途徑;

  2、應(yīng)急途徑(S途徑)。利用次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸酐轉(zhuǎn)移酶和胸腺嘧啶核糖核苷酸催化黃嘌呤和胸腺嘧啶合成相應(yīng)的核苷酸;

  未融合的細(xì)胞在D途徑中會(huì)被氨基蝶呤阻斷,會(huì)因?yàn)槿狈Ψ敝衬芰Χ劳?在S途徑中會(huì)因?yàn)樽陨聿痪邆銼途徑而死亡;

  第二次篩選:

  一般采用有限稀釋克隆下?lián)艿姆椒?,將?xì)胞多倍稀釋后接種在細(xì)胞培養(yǎng)板上,其上清液可與特定抗原結(jié)合的標(biāo)記為陽性孔。陽性孔中的細(xì)胞需要再次進(jìn)行有限稀釋操作,3-4次后,即可確認(rèn)其中的細(xì)胞為單克隆抗體。一般來說,第二次篩選的過程也是一個(gè)鑒定的過程。

  總的來說,雜交瘤細(xì)胞的篩選需要進(jìn)行4-5次,這樣才能保證制備出來的細(xì)胞是合格的細(xì)胞,通過培養(yǎng),產(chǎn)生的單克隆抗體才是我們需要的。但是這種方式制備出來的抗體因?yàn)橥獠織l件的變化,會(huì)導(dǎo)致不同批次生產(chǎn)出來的抗體存在著一定的差異。所以,如果需要多次生產(chǎn)同樣的抗體的話,我們需要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株來進(jìn)行制備。更多有關(guān)單克隆抗體制備方面的知識(shí),敬請關(guān)注武漢普健生物。