抗體測序，其實就是對抗體蛋白進(jìn)行從頭到尾的一次序列測試工作，它廣泛應(yīng)用于基因組序列、外顯子序列、DNA甲基化序列以及RNA轉(zhuǎn)錄組序列。在我們進(jìn)行單克隆抗體生產(chǎn)的時候，就常常會使用抗體測序技術(shù)，可以說，雜交瘤技術(shù)是目前抗體測序技術(shù)會用最廣泛且最成熟的一個平臺。

　　什么是抗體測序技術(shù)?

　　其實抗體測序技術(shù)的原理和我們上面說的一樣，就是通過對抗體蛋白進(jìn)行從頭到尾的測序。通過多酶解技術(shù)，通過高分辨率質(zhì)譜和獨特的數(shù)據(jù)分析的方式來進(jìn)行相關(guān)序列的檢測。其原理為通過測量串聯(lián)質(zhì)譜中兩個片段離子之間的質(zhì)量差來確定蛋白氨基酸殘基的質(zhì)量，然后沿著蛋白的主鏈來確定每個氨基酸，最終得到氨基酸的完整序列的方式。

　　抗體測序的主要流程是什么?

　　1、全序列覆蓋

　　在通過如上方法進(jìn)行抗體測序的時候，需要確保每個點位的氨基酸有超過10中不同的肽段支持，在對氨基酸進(jìn)行質(zhì)量控制，確保每個質(zhì)譜里都有強離子片段峰證據(jù)。這樣，才能保證其全序列覆蓋;

　　2、抗體質(zhì)量核對

　　對輕重鏈進(jìn)行質(zhì)量測定，確保其在范圍內(nèi)，以確保組裝的抗體序列;

　　3、亮氨酸和異亮氨基酸確定

　　亮氨酸和異亮氨酸的殘基通常是無法區(qū)分的，但是卻又容易造成其親和力出現(xiàn)偏差的情況。所以，我們在進(jìn)行相關(guān)測試的時候，可以使用一種集成的策略，通過同源性數(shù)據(jù)統(tǒng)計的方式，明確區(qū)分亮氨酸和異亮氨酸;

　　其實抗體測序的原理并不復(fù)雜，但是，很多用戶在自行進(jìn)行相關(guān)測序的時候，往往會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，最終造成結(jié)果偏差的情況?？偟膩碚f，主要是一些細(xì)節(jié)方面的問題，只要將這些方面的做好，測序則完全不是問題。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供抗體制備、蛋白表達(dá)以及抗體測序服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。