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什么是內(nèi)參抗體?如何挑選合適的內(nèi)參抗體?

發(fā)表時(shí)間:2022-12-19 訪問次數(shù):901

  抗體因?yàn)殡S著使用需求的不同,也發(fā)展出了很多不同的類型,比如內(nèi)參抗體、標(biāo)簽抗體。這些抗體針對(duì)不同的使用需求,有著不同的特性和使用方法,所以,選擇合適的抗體,也是我們?nèi)粘9ぷ髦蟹浅V匾囊画h(huán)。那么,什么是內(nèi)參抗體呢?它的作用又有哪些呢?且看普健生物和您一一講述。

  什么是內(nèi)參抗體?

  所謂的內(nèi)參抗體,我們可以從字面上來解釋,就是內(nèi)部參照抗體,它和目的抗體沒有直接聯(lián)系,而是一種精準(zhǔn)制備抗體的輔助抗體。

  比如我們需要對(duì)不同條件或不同組織細(xì)胞中表達(dá)的目的蛋白的相對(duì)多少進(jìn)行比較,那么就需要有相同的定量,這樣才會(huì)具備比較的基礎(chǔ)。但是在實(shí)驗(yàn)中,可能會(huì)因?yàn)榈鞍诐舛炔惶珳?zhǔn),或者在上樣蛋白的時(shí)候,因?yàn)椴僮鞫a(chǎn)生偏差,這個(gè)時(shí)候,就需要有一款內(nèi)部參照抗體來進(jìn)行校正作用。這類抗體需要在冉細(xì)胞或組織間具備恒定的表達(dá)特性,而且表達(dá)量要高。這類抗體,我們稱之為內(nèi)參抗體。

  如何挑選合適的內(nèi)參抗體呢?

  對(duì)于內(nèi)參抗體的挑選需要注意到很多細(xì)節(jié)方面的問題,通常我們可以結(jié)合如下四點(diǎn)進(jìn)行挑選:

  1、根據(jù)樣本來源挑選。針對(duì)哺乳動(dòng)物的組織細(xì)胞樣本,我們可以從GAPDH、COX4等產(chǎn)品中進(jìn)行挑選,其他來源的樣本,則需要結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)挑選;

  2、根據(jù)分子大小挑選。針對(duì)分子量的不同,我們需要結(jié)合分子大小來挑選合適的內(nèi)參抗體。在WB實(shí)驗(yàn)中,我們一般選擇大小差異5kDa以上,也就是說不要選擇分子量太過接近的,否則不利于后期的條帶分析;

  3、結(jié)合表達(dá)位置挑選。一般的蛋白檢測(cè)可以考慮選擇那些常用的內(nèi)參抗體(比如:β-actin、GAPDH抗體等)。當(dāng)然了,針對(duì)哪些核蛋白很定的,我們可以考慮結(jié)合文獻(xiàn)來進(jìn)行選擇;

  4、根據(jù)表達(dá)恒定性挑選。挑選的抗體需要看其是否會(huì)受到條件變化的影響,比如溫度、PH值、濃度等方面的影響,這個(gè)很重要。比如,GAPDH常常用來作為內(nèi)參抗體,到那時(shí)在進(jìn)行代謝研究的時(shí)候,就不適用;

  總的來說,內(nèi)參抗體的選擇并沒有想象中的復(fù)雜,需要結(jié)合使用需求,選擇合適的。當(dāng)實(shí)在不知道如何選擇的時(shí)候,我們可以結(jié)合相應(yīng)的文獻(xiàn)來進(jìn)行挑選,一般來說,都能夠選擇到合適的抗體產(chǎn)品。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)的抗體制備和定制服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。