對于新手來說,昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)中常常會(huì)遇到各種各樣的問題,這些問題在看前輩們做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候完全感覺不到,可是當(dāng)自己親自操作的時(shí)候,往往就會(huì)浮現(xiàn)。那么,昆蟲細(xì)胞蛋白表達(dá)中一般會(huì)遇到哪些問題呢?今天普健生物就和大家具體聊聊。
1、哪類蛋白適合選擇昆蟲蛋白表達(dá)?
對于一些表達(dá)相對困難的蛋白都可以考慮用昆蟲來表達(dá),比如:激酶、昆蟲來源蛋白、糖蛋白、衣殼蛋白、膜蛋白等;
2、昆蟲蛋白表達(dá)是用昆蟲嗎?
昆蟲表達(dá)并非用昆蟲來表達(dá),而是通過培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞,用細(xì)胞來表達(dá)蛋白;
3、目的基因是否整合到昆蟲細(xì)胞基因中?
昆蟲表達(dá)并不會(huì)將目的基因整合到昆蟲基因中,而是在特定的條件下,用桿狀病毒攜帶目的基因去侵染昆蟲細(xì)胞,而后利用宿主的環(huán)境進(jìn)行自我復(fù)制,從而獲得相應(yīng)蛋白;
4、昆蟲蛋白表達(dá)是否對蛋白大小有要求?
對于大小在10kd-100kd的蛋白適合于任何表達(dá)系統(tǒng),110dk-250kd這類大蛋白則首選昆蟲表達(dá)系統(tǒng);
5、衣殼蛋白表達(dá)后如何純化?
一般來說,衣殼蛋白都較難純化,主要是因?yàn)槠淇扇苄圆缓?、不掛柱、容易形成聚合體等問題。我們通常會(huì)采用多種純化方式來進(jìn)行綜合提純,這樣才能在一定程度上達(dá)到純化的目的;
6、目的蛋白表達(dá)后會(huì)和病毒一起釋放出來嗎?
目的蛋白是否會(huì)釋放到細(xì)胞外主要由蛋白的特性決定,當(dāng)然了,信號肽也在一定程度上有著一定的影響,一般來說,蛋白都會(huì)釋放到細(xì)胞外。當(dāng)然了,有一些特殊情況,需要特殊對待;
7、如何保存蛋白?
一般來說,為了保護(hù)其中的病毒,我們需要加入2%培養(yǎng)基級別的BS或胎牛血清,在4度或負(fù)80度的環(huán)境中保存;
事實(shí)上能夠影響到蛋白特性的因素有很多,而且不同的蛋白所需環(huán)境也是各不相同的。所以,我們在進(jìn)行相關(guān)蛋白實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,需要結(jié)合實(shí)際情況來進(jìn)行選擇。武漢普健生物作為一家專業(yè)的蛋白制備公司,專業(yè)為廣大用戶提供昆蟲蛋白表達(dá)服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。