昆蟲表達系統(tǒng)相信大家都不會陌生,它是四大蛋白表達系統(tǒng)之一(主要包含:原核細胞表達系統(tǒng)、酵母表達系統(tǒng)、昆蟲表達系統(tǒng)以及哺乳動物表達系統(tǒng))。關于昆蟲表達系統(tǒng)我們在前面和大家簡單介紹過,今天我們再和大家具體聊聊有關昆蟲表達系統(tǒng)的優(yōu)缺點及其詳細的制備步驟。
昆蟲表達系統(tǒng)的優(yōu)點:
1、能夠輕松時間糖基化、乙?;?、磷酸化等翻譯修飾操作;
2、分子特性相對簡單,使得其操作起來更加的簡單;
3、因為其細胞能夠懸浮生長,使得其培養(yǎng)起來更加的簡單;
4、對于外源基因能夠實現(xiàn)高效表達且其繁殖不受外源基因影響;
昆蟲表達系統(tǒng)的步驟:
1、引物設計與合成
選擇合適的基因序列,并將目的基因引入到序列中;
2、基因擴增與克隆
通過所得RNA進行反轉率,合成我們所需的cDNA,并以cDNA為模板,對其進行擴增和測序;
3、病毒質粒構建
將擴增所得基因克隆到質粒中,并對其進行培育、擴增;
4、表達蛋白
通過設計合理的表達環(huán)境,對所得基因序列進行表達,獲得蛋白表達產(chǎn)物的混合液;
5、蛋白純化及鑒定
通過蛋白純化的手段對蛋白進行提取和純化,并對純化后的蛋白進行鑒定,以測定所得蛋白是否符合我們需求;
大家應該不難看出,昆蟲表達系統(tǒng)和其他表達系統(tǒng)的表達步驟之間并不存在太大的差別,只是在選擇宿主方面存在著不同,其他步驟大概類似。但是,想要表達成功,則有很多細節(jié)方面需要引起注意,而恰恰是這些細節(jié)制約著所得蛋白是否能夠滿足需求。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供昆蟲表達蛋白服務,如果您有相關需求,歡迎來電咨詢。
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