重組蛋白表達(dá)和傳統(tǒng)的蛋白表達(dá)方式有一定的區(qū)別，因?yàn)槠渫ㄟ^(guò)基因重組后表達(dá)，所以容易造成一些傳統(tǒng)表達(dá)中不會(huì)遇到的問(wèn)題。雖然說(shuō)這個(gè)問(wèn)題是一個(gè)老生常談的話題了，但是，其重要程度卻不言而喻。那么，哪些因素會(huì)影響到重組蛋白表達(dá)的結(jié)果呢?普健生物在這里和大家具體聊聊。

　　1、載體構(gòu)建錯(cuò)誤

　　其實(shí)這是一個(gè)新人最常犯的錯(cuò)誤，因?yàn)榕e(cuò)讀碼框，導(dǎo)致蛋白出現(xiàn)不表達(dá)的情況。載體的構(gòu)建可以說(shuō)是蛋白表達(dá)的基礎(chǔ)，需要考慮到啟動(dòng)子、克隆位點(diǎn)、終止子、標(biāo)簽等多種因素，只有將這一步做好了，重組蛋白表達(dá)才能夠進(jìn)行下去;

　　2、宿主菌選擇不當(dāng)

　　不同的菌種因?yàn)槠浠蛐筒煌?，適合于表達(dá)的蛋白也是各不相同的。如果選擇不當(dāng)，不僅會(huì)造成蛋白表達(dá)率低，甚至可能因?yàn)閮?nèi)毒素的緣故，造成蛋白性質(zhì)改變的情況;

　　3、密碼子優(yōu)化不當(dāng)

　　不同的基因在密碼子的使用上有著明顯的偏愛(ài)性，不同物種在啟動(dòng)子上也是各不相同，所以，一定要結(jié)合選擇宿主和目的基因的特性來(lái)選擇合適的啟動(dòng)子;

　　4、mRNA穩(wěn)定性及結(jié)構(gòu)

　　當(dāng)mRNA穩(wěn)定性不足，或者結(jié)構(gòu)發(fā)生折疊后，會(huì)造成后期反轉(zhuǎn)錄時(shí)出現(xiàn)問(wèn)題，自然也就造成了蛋白表達(dá)不準(zhǔn)確或發(fā)生沉淀等現(xiàn)象。一般來(lái)說(shuō)是因?yàn)榄h(huán)境因素影響，或者出現(xiàn)了內(nèi)毒素等問(wèn)題;

　　5、發(fā)生基因突變

　　所需表達(dá)的基因序列發(fā)生了突變，所表達(dá)出來(lái)的蛋白已經(jīng)不是我們所需蛋白了，自然達(dá)不到我們的要求了。當(dāng)然了，其他位置的基因發(fā)生突變也可能會(huì)造成蛋白不表達(dá)或表達(dá)率降低的情況;

　　總的來(lái)說(shuō)，重組蛋白表達(dá)在表達(dá)過(guò)程中，很多因素都可能會(huì)造成其表達(dá)率降低甚至不表達(dá)，這個(gè)時(shí)候，我們就需要通過(guò)分析，總結(jié)出其問(wèn)題所在，而后在予以整改，這樣才能保證所得蛋白達(dá)到我們的預(yù)期。當(dāng)然了，很多時(shí)候，可能就是一個(gè)小問(wèn)題，需要有扎實(shí)的技術(shù)才可以，否則，非常的浪費(fèi)時(shí)間。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢。