單克隆抗體制備后,我們都需要對所得抗體進行相應的純化工作,只有提純,才能讓減少抗體的雜質,并提升抗體的作用效果。可以說,抗體純化是抗體必不可少的過程。那么,您知道怎么做抗體純化嗎?抗體純化的具體操作步驟是怎樣的?今天普健生物就和大家具體聊聊。
我們知道,抗體主要來源于血清,通過反復想動物體內(nèi)注入抗原產(chǎn)生。然后,對血清進行相關抗體的提取,這個過程就是抗體純化。
抗體純化的原理:
抗體純化的原理主要是根據(jù)蛋白的一些性質不同,將其從混合液中提取出來的方式。比如利用蛋白分子大小不同、PH溶解值不同、溶解度不同、吸附性質不同、生物親和力不同等一系列的手段,將其從溶液中提取出來的方式。
抗體純化的具體步驟:
1、蛋白提取
通過手段破碎細胞,使得蛋白得以釋放出來。通常利用裂解緩沖液破碎細胞,而后通過離心等方法去除細胞碎片,再將蛋白從裂解液中溶解出來;
2、抗體富集
通過層析的方式,使得抗體更集中。常見的方法有親和層析(利用抗體及其特異性之間的特異性結合)、離子交換層析(利用抗體與離子交換介質之間的電荷相互作用來實現(xiàn)富集)、尺寸排除層析(根據(jù)分子大小差異,利用多孔介質篩選);
3、純化和濃縮
通過透析膜將富集的抗體從介質中洗脫出來,并去除鹽離子等小分子雜質,之后在利用濃縮裝置,將目標抗體濃縮到較小的體積;
4、純化驗證
通過SDS-PAGE、Western blot等手段,驗證抗體的分子量以及特異性結合的能力;
總的來說,抗體純化是一個非常復雜的過程,我們需要結合抗體的具體情況選擇具體的純化方法,這樣不僅能節(jié)約大量的時間,而且能夠有效降低其成本投入。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供單克隆抗體純化服務,如果您有相關需求,歡迎來電咨詢。