質(zhì)粒廣泛存在于生物界，是易總存在于染色體意外的DNA分子，具備自主復(fù)制能力。在日常蛋白制備過程中，我們常常通過基因技術(shù)對質(zhì)?；蛐畔⑦M行修改，從而制備我們所需的蛋白。但是在制備過程中，會遇到很多問題，導(dǎo)致蛋白制備失敗。有鑒于此，普健生物和您具體聊聊有關(guān)質(zhì)粒提取過程中的一些常見問題。

　　1、時間控制方面的問題

　　對于裂解來說，時間不宜過長，一般來說，不要超過5分鐘。吸附時間不夠，或者溶解時間不夠，都會造成質(zhì)粒DNA提取失敗;

　　2、大腸桿菌老化

　　大腸桿菌頻繁使用會導(dǎo)致其老化的現(xiàn)象，所以，在進行大腸桿菌培養(yǎng)時，需要重新挑選菌落進行培養(yǎng);

　　3、質(zhì)粒復(fù)制數(shù)量過低

　　所選質(zhì)?？截悢?shù)過低，會在很大程度上早場質(zhì)粒DNA提取量低的情況，在實驗時，需要盡可能挑選高拷貝數(shù)的載體;

　　4、配置的溶液使用不當

　　溶液溫度過低時，可能會出現(xiàn)渾濁的情況，之后保持在37度的環(huán)境下，才能保證溶液清亮;

　　5、吸附柱過載

　　對于不同的產(chǎn)品來說，吸附柱的吸附能力是各不相同的，如果提取的質(zhì)粒數(shù)量較大，需要進行多次提取;

　　6、質(zhì)粒未能全部溶解

　　洗脫質(zhì)粒的時候，需要適當對其進行加溫或延長溶解時間;

　　7、洗脫液加入的位置不對

　　洗脫液需要在硅膠膜的中間位置加入，這樣才能保證其達到最大洗脫率;

　　8、過多的乙醇殘留

　　在我們選擇漂洗液進行洗滌后，需要盡可能地去除殘留的液體，以避免殘留的乙醇對后期的實驗造成影響;

　　9、洗脫液的體積過小

　　洗脫體積對回收率會造成一定的影響，過高的洗脫體積會造成產(chǎn)品濃度過低的情況;

　　雖然說質(zhì)粒提取能夠在很大程度上降低目的蛋白制備的操作步驟，但是，操作過程中也有很多需要注意的細節(jié)問題，需要在制備過程中多注意。當然了，對于大部分的公司來說，這個過程基本上都不成問題。普健生物為您提供專業(yè)的蛋白制備服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。