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盤點質(zhì)粒提取過程中的一些常見問題

發(fā)表時間:2023-09-18 訪問次數(shù):836

  質(zhì)粒廣泛存在于生物界,是易總存在于染色體意外的DNA分子,具備自主復(fù)制能力。在日常蛋白制備過程中,我們常常通過基因技術(shù)對質(zhì)?;蛐畔⑦M行修改,從而制備我們所需的蛋白。但是在制備過程中,會遇到很多問題,導(dǎo)致蛋白制備失敗。有鑒于此,普健生物和您具體聊聊有關(guān)質(zhì)粒提取過程中的一些常見問題。

  1、時間控制方面的問題

  對于裂解來說,時間不宜過長,一般來說,不要超過5分鐘。吸附時間不夠,或者溶解時間不夠,都會造成質(zhì)粒DNA提取失敗;

  2、大腸桿菌老化

  大腸桿菌頻繁使用會導(dǎo)致其老化的現(xiàn)象,所以,在進行大腸桿菌培養(yǎng)時,需要重新挑選菌落進行培養(yǎng);

  3、質(zhì)粒復(fù)制數(shù)量過低

  所選質(zhì)??截悢?shù)過低,會在很大程度上早場質(zhì)粒DNA提取量低的情況,在實驗時,需要盡可能挑選高拷貝數(shù)的載體;

  4、配置的溶液使用不當

  溶液溫度過低時,可能會出現(xiàn)渾濁的情況,之后保持在37度的環(huán)境下,才能保證溶液清亮;

  5、吸附柱過載

  對于不同的產(chǎn)品來說,吸附柱的吸附能力是各不相同的,如果提取的質(zhì)粒數(shù)量較大,需要進行多次提取;

  6、質(zhì)粒未能全部溶解

  洗脫質(zhì)粒的時候,需要適當對其進行加溫或延長溶解時間;

  7、洗脫液加入的位置不對

  洗脫液需要在硅膠膜的中間位置加入,這樣才能保證其達到最大洗脫率;

  8、過多的乙醇殘留

  在我們選擇漂洗液進行洗滌后,需要盡可能地去除殘留的液體,以避免殘留的乙醇對后期的實驗造成影響;

  9、洗脫液的體積過小

  洗脫體積對回收率會造成一定的影響,過高的洗脫體積會造成產(chǎn)品濃度過低的情況;

  雖然說質(zhì)粒提取能夠在很大程度上降低目的蛋白制備的操作步驟,但是,操作過程中也有很多需要注意的細節(jié)問題,需要在制備過程中多注意。當然了,對于大部分的公司來說,這個過程基本上都不成問題。普健生物為您提供專業(yè)的蛋白制備服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。