關(guān)于重組蛋白,相信一些有一點(diǎn)技術(shù)的公司都可以做表達(dá)出來,但是,如果想要將蛋白用于下游實(shí)驗(yàn),那么,成功表達(dá)的重組蛋白就顯得非常的重要了。蛋白并不是說表達(dá)出來就行,而是需要為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)提供有效助力,如果在一開始的時(shí)候就優(yōu)化了蛋白的可溶性,那么,后續(xù)的實(shí)驗(yàn)將會(huì)得到極大的簡(jiǎn)化。因此,為重組蛋白選擇一款正確的標(biāo)簽就顯得非常重要了。
常用的標(biāo)簽中都有什么?
很多人對(duì)于“正確”這個(gè)詞有著一定的誤解,只是覺得挑選一個(gè)標(biāo)簽讓蛋白得以表達(dá)即可。其實(shí)不然,所選的標(biāo)簽需要幫助我們獲得可溶性蛋白,不僅簡(jiǎn)化相應(yīng)的蛋白純化方案,更是不會(huì)對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響,甚至起到促進(jìn)作用。所以,對(duì)于那些具備多個(gè)切割位點(diǎn)的蛋白來說,我們需要考慮的問題就是蛋白的溶解、表達(dá)以及純化點(diǎn)是否可以切除,以及切除這個(gè)點(diǎn)是否會(huì)影響到后續(xù)目的蛋白的行為。
如何獲得可溶性蛋白?
對(duì)于重組蛋白來說,它在真核細(xì)菌中表達(dá)時(shí),最常見的問題就是不溶。所以,想要使得其可溶性提升,需要結(jié)合如下三個(gè)方面來進(jìn)行考慮。
1、IPTG濃度
簡(jiǎn)單來說,就是控制好IPTG的濃度,可以嘗試多幾個(gè)不同的濃度,選擇一下,看哪個(gè)濃度能夠提供最高的可溶性蛋白濃度;
2、溫度
首先,我們選擇37度的典型溫度來進(jìn)行生長(zhǎng)和誘導(dǎo)分離,一般來說,在更低的溫度下蛋白的表達(dá)程度更高。然后,我們可以分別嘗試在30度、25度、18度等條件下進(jìn)行誘導(dǎo),選擇最佳誘導(dǎo)溫度后,再加入IPTG;
3、誘導(dǎo)時(shí)間
當(dāng)然了,誘導(dǎo)的時(shí)間并非越長(zhǎng)越好,對(duì)于那些“有毒蛋白”顯得尤為明顯。一般來說,我們?cè)谡T導(dǎo)時(shí),選擇隔幾個(gè)小時(shí)取一次樣,并檢查目的蛋白的表達(dá)量;
當(dāng)然了,如果通過如上這些手段都沒有達(dá)到我們的要求,那么,我們可以考慮通過只表達(dá)蛋白的一部分,或者選擇不同的表達(dá)系統(tǒng)來進(jìn)行表達(dá),甚至保留目的蛋白的翻譯后修飾。總的來說,通過多次的實(shí)驗(yàn)總會(huì)獲得我們所需的重組蛋白。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達(dá)服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。