當我們一些實驗需求時,我們常常會用到穩(wěn)定細胞株構(gòu)建技術(shù),比如:需要頻繁轉(zhuǎn)染、提升基因干擾效果、需要進行極高拷貝數(shù)的表達等等。而穩(wěn)定細胞株技術(shù)就是在活細胞的狀態(tài)下,通過大量多代的培養(yǎng)所得的細胞。這類細胞不僅具有正常的生理功能,而且可以實現(xiàn)無限繁殖,能夠穩(wěn)定地表達蛋白。
穩(wěn)定細胞株的構(gòu)建主要包括如下過程:
1、構(gòu)建載體。
2、轉(zhuǎn)染、感染。
3、目的蛋白檢測。
4、抗生素篩選。
5、目的蛋白再次檢測。
6、細胞株穩(wěn)定性檢測。
穩(wěn)定細胞株的構(gòu)建一般采用兩種方法:體質(zhì)轉(zhuǎn)染后的單克隆穩(wěn)定株;二是應用逆轉(zhuǎn)錄病毒,慢病毒轉(zhuǎn)染,從而篩選穩(wěn)定細胞株。
通常情況下,我們會將質(zhì)粒整合到染色體上,然后用相應的質(zhì)粒中的DNA去篩選細胞核,形成穩(wěn)定表達的細胞株。
細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后即為細胞系(cell line), 由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳代次數(shù)有限, 可稱為有限細胞系(finite cell line), 如可以連續(xù)培養(yǎng), 則稱為連續(xù)細胞系(continuous cell line), 培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。
采用穩(wěn)定細胞株構(gòu)建技術(shù)能夠在極大程度上保持細胞的穩(wěn)定性,從而穩(wěn)定地提供蛋白產(chǎn)品,讓其不會因為不同細胞而產(chǎn)生蛋白差異的現(xiàn)象。而且大量表達的穩(wěn)定細胞株可以在更大程度上解決大批量基因片段引入的問題,實現(xiàn)更好地表達。普健生物是一家擁有15年蛋白抗體生產(chǎn)經(jīng)驗的企業(yè),專業(yè)為廣大用戶提供蛋白抗體制備服務,優(yōu)質(zhì)的穩(wěn)定細胞株構(gòu)建技術(shù),為您解決各類蛋白抗體需求。