穩(wěn)定細(xì)胞株廣泛應(yīng)用于重組蛋白、抗體生產(chǎn)、檢測分析等領(lǐng)域,因?yàn)槠浔磉_(dá)的蛋白穩(wěn)定性好、批次間的差異小,所以,被廣泛使用與醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。我們知道,在穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建的過程中,會(huì)涉及到一個(gè)篩選的過程,今天我們就和大家具體聊聊有關(guān)穩(wěn)定細(xì)胞株篩選方面的工作。
如何進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選呢?普健生物今天在這里和大家分享兩種篩選方法。
方法一:通過將質(zhì)粒整合到染色體上后,通過單克隆篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。
1、以10天內(nèi)細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度來作為基準(zhǔn)濃度;
2、細(xì)胞接種,轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前接種的細(xì)胞,轉(zhuǎn)染細(xì)胞密度達(dá)到60%-80%的細(xì)胞;
3、轉(zhuǎn)染;
4、篩選具備抗性的細(xì)胞,并鑒定所篩選的結(jié)果;
方法二:利用逆轉(zhuǎn)錄病毒篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。
1、人源化的抗體基因轉(zhuǎn)接到慢病毒載體上;
2、使用包裝細(xì)胞包裝病毒;
3、用病毒去轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞;
4、篩選出合適的細(xì)胞株;
其實(shí)大家也不難看出,穩(wěn)定細(xì)胞株篩選的過程其實(shí)都大同小異,大體上的程序基本相同,只是在細(xì)節(jié)方面有著一定的區(qū)別,這也是細(xì)胞株構(gòu)建成功與否的原因所在。普健生物專業(yè)為您構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。