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盤點(diǎn)幾種常見的蛋白互作檢測方法-普健生物

發(fā)表時(shí)間:2022-11-25 訪問次數(shù):1995

  在蛋白制備的過程中,我們常常會(huì)利用一些方法來判斷蛋白的性能,比如SPR(分子間相互作用力分析),就能夠很好地為之后蛋白制備提供數(shù)據(jù)支持。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步,各種各樣的方法也營運(yùn)而生。今天,普健生物就在這里和大家盤點(diǎn)常用的幾種蛋白互作技術(shù)及其優(yōu)缺點(diǎn)。

  1、免疫共沉淀技術(shù)

  免疫共沉淀(Co-lmmunoprecipitation,COIP)技術(shù)其實(shí)就是利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合原理而成。主要是通過在細(xì)胞裂解液之中添加特異性抗體,而后再通過靜置等一系列的手段讓其沉淀。而后再通過質(zhì)譜法來檢測抗原的結(jié)合蛋白成員;

  免疫共沉淀技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是其過程更加符合體內(nèi)真是生理情況,而且實(shí)驗(yàn)條件溫和,不會(huì)出現(xiàn)人為影響的情況;缺點(diǎn)也非常明顯,對(duì)于那些結(jié)合力弱或者會(huì)瞬間結(jié)合的蛋白來說,研究起來就相對(duì)困難一些;

  2、Pull Down技術(shù)

  Pull Down技術(shù)則是通過先谷底固化或已經(jīng)標(biāo)記過的蛋白或標(biāo)簽蛋白從裂解液中特異性結(jié)合出其中的蛋白的方式。這個(gè)方式也是利用分子間相互作用的方式,但是和COIP技術(shù)不同,它需要先把誘導(dǎo)蛋白純化出來后,才能與目的蛋白溶液進(jìn)行孵化,無法自行模擬細(xì)胞內(nèi)的天然環(huán)境;

  3、雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)

  雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)其實(shí)就是通過熒光蛋白多肽鏈上進(jìn)行操作,在其末端新增兩個(gè)多肽片段,然后將其分別連接到能發(fā)生作用的目標(biāo)蛋白上。以為你目標(biāo)蛋白發(fā)生反應(yīng),且含有熒光蛋白,就能夠讓其產(chǎn)生熒光。這個(gè)技術(shù)最大的優(yōu)點(diǎn)就是讓其實(shí)現(xiàn)了可視化,不過操作相對(duì)要復(fù)雜一些;

  4、酵母雙雜交技術(shù)

  酵母雙雜交技術(shù)可以說是現(xiàn)階段使用最為廣泛的一項(xiàng)技術(shù)了,也是現(xiàn)階段最重要的方法之一。其通過將靶蛋白和誘餌蛋白特異性結(jié)合后,因?yàn)檎T導(dǎo)蛋白結(jié)合了基因的啟動(dòng)子,將其置于酵母細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行表達(dá),如果能檢測到基因表達(dá)的產(chǎn)物則說明雙方有相互作用,反之則表示沒有。這個(gè)方法成本低、檢驗(yàn)結(jié)果迅速,操作簡單;

  當(dāng)然了,在蛋白研究的過程中不可能僅僅就這幾種方法,還有噬菌體展示技術(shù)、等離子共振技術(shù)、抗體蛋白陣列技術(shù)等等,我們就不在這里一一詳述了。相對(duì)來說,后面提出的這些方面在技術(shù)和成本上有著更高的需求,需要具備一定實(shí)力的企業(yè)才能展示,我們?cè)诤竺嬖俸痛蠹以敿?xì)描述。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白抗體制備和定制服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。