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盤點重組蛋白表達(dá)實驗中設(shè)計上的一些表達(dá)異常分析

發(fā)表時間:2022-12-01 訪問次數(shù):854

  重組蛋白表達(dá)實驗中,即便是完全按照自己設(shè)計的程序來操作,也可能會出現(xiàn)各種各樣的問題,只要這些問題出現(xiàn),基本上就代表我們的實驗沒成功。其實,實驗做多了之后,這種問題可以說是非常的普遍。有鑒于此,普健生物就和大家總結(jié)一下有關(guān)重組蛋白表達(dá)過程中常見的一些表達(dá)異常的情況及其解決辦法。

  1、密碼子位移。外源基因序列內(nèi)部核糖體結(jié)合位點出現(xiàn)偏移,或者受到一些其他因素干擾,導(dǎo)致密碼子出現(xiàn)位移的情況;

  2、稀有子密碼問題。我們可以使用相關(guān)軟件對稀有子密碼進行分析,在進行重組表達(dá)之前,對蛋白序列進行優(yōu)化。我們紙袋,在蛋白表達(dá)起始位點前的15個氨基酸密碼子至關(guān)重要,連續(xù)的兩個稀有子密碼可能會造成表達(dá)效率降低的情況。所以,我們可以通過對其進行優(yōu)化,避免如上可能會出現(xiàn)的問題后再進行表達(dá);

  3、信號肽表達(dá)問題。一般來說,大腸桿菌缺乏加工蛋白信號肽的機制,所以,我們在進行相關(guān)真核表達(dá)時候,需要引起額外的注意;

  4、GC含量高問題。一般來說,基因序列中GC含量超過70%的時候,就很難進行蛋白表達(dá)了,想要表達(dá)成功,我們只能進行相關(guān)優(yōu)化工作,降低其中GC含量后再表達(dá);

  5、蛋白大小異常問題。小于10KD或者大于100KD的蛋白都難以表達(dá),如果遇到這種蛋白,可考慮使用其他辦法;

  6、蛋白標(biāo)簽選擇問題。通常我們需要在蛋白表達(dá)中加入各種標(biāo)簽,可一些標(biāo)簽會影響蛋白表達(dá),甚至造成蛋白表達(dá)不成功。這個時候,我們就需要考慮采用一些易于表達(dá)的標(biāo)簽,不要選擇難以表達(dá)的標(biāo)簽;

  在重組蛋白表達(dá)的過程中,我們常常會遇到這樣或者那樣的問題,一般來說,我們只需要根據(jù)實驗的要求來進行,都不會出現(xiàn)什么問題。牢記如上的六點,在表達(dá)過程中多注意相關(guān)情況,相信蛋白表達(dá)失敗的概率不會太高。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達(dá)服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。