單克隆抗體作為現(xiàn)階段效果最佳、使用范圍最廣的一款藥劑,在臨床試驗中起到了良好的效果。但是,現(xiàn)階段常用的一些抗體制備方式中,常常會出現(xiàn)異源反應的情況。不僅會造成效果達不到預期,更有甚者會造成患者的不良反應。作為解決異源性的方法之一,全人源化抗體起到了至關(guān)重要的作用。噬菌體展示技術(shù)作為全人源抗體制備的主要方式,在極大程度上解決了這個問題。
那么,什么是噬菌體展示技術(shù)呢?
噬菌體展示技術(shù)其實就是一種高效的基因表達篩選技術(shù),它通過將外源蛋白表達基因剪切到噬菌體的外殼基因中,在噬菌體表達外殼蛋白的時候,會同時表達目的蛋白。當然了,因為一些外殼蛋白可能會影響到目的蛋白的效果,我們還可以通過分離和篩選純化等一系列的操作進一步提純目的蛋白。
目前噬菌體展示技術(shù)已經(jīng)非常的成熟了,在抗原表位分析、單克隆抗體制備、抗體人源化、藥物篩選等方面有著廣泛的使用。
噬菌體展示技術(shù)的技術(shù)難點體現(xiàn)在哪些方面?
雖然說噬菌體展示技術(shù)存在著如此眾多的優(yōu)點,但是,也并不是說隨便一家公司就可以做的,不僅僅是因為技術(shù)方面的原因,成本投入也是很大一部分原因。想要噬菌體展示成功,有兩大難點:噬菌體建庫和噬菌體篩選。
1、噬菌體建庫
將從B細胞內(nèi)提取的抗體輕重鏈抗體片段群與噬菌體外殼蛋白融合,并進行融合表達,使其表達與噬菌體外殼表面,從而形成噬菌體展示抗體庫。主要分為三種:scFv庫、Fab庫、VHH庫;
2、噬菌體篩選
噬菌體篩選是其中的關(guān)鍵環(huán)節(jié),主要包括淘篩和鑒定兩個步驟。
一般在進行篩選的時候,我們需要進行報備抗原及對照,通過3-4輪的篩選,選擇出合適的抗體。而后再通過多克隆ELISA判斷特異富集,而后通過單克隆ELISA、陽性克隆VALIDATED ELISA來確定克隆測序,最后通過重組抗體表達的方式來制備所需蛋白;
噬菌體展示技術(shù)的優(yōu)勢體現(xiàn)在哪些方面?
和傳統(tǒng)蛋白制備技術(shù)來說,噬菌體展示技術(shù)制備的蛋白能夠滿足大批量的生產(chǎn),同時也可以通過基因技術(shù),提升抗體在親和力、免疫原性等方面的能力,而且篩選周期短、操作簡單、應用范圍廣等優(yōu)勢。
總的來說,噬菌體展示技術(shù)在極大程度上滿足的我們在抗體制備方面的需求。無論是單克隆抗體制備,還是抗體人源化方面,都存在著傳統(tǒng)抗體制備方式所不具備的優(yōu)勢。但是也有著不住之處,比如需要以一定的技術(shù)實力去攻克建庫以及篩選方面的難題,同時還需要具備相應的經(jīng)濟實力。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供噬菌體展示服務,如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。