噬菌體展示技術(shù)在新藥研發(fā)方面有著廣泛的使用，在之前我們和大家聊過有關(guān)噬菌體的相關(guān)只是，大家可以點擊“什么是噬菌體展示技術(shù)?它的主要作用有哪些?”去詳細了解一下。后來有很多客戶問到有關(guān)噬菌體展示文庫構(gòu)建方面的知識，有鑒于此，我們在這里統(tǒng)一和大家聊一聊。

　　什么是噬菌體展示文庫構(gòu)建?

　　我們知道，噬菌體展示技術(shù)就是通過將外源基因插入到噬菌體蛋白外殼基因的適當(dāng)位置，讓其隨著噬菌體的傳代，在子代噬菌體表面得到展示，而后通過篩選和淘選的過程后，獲得我們所需蛋白的方式。而噬菌體展示文庫則是多種不同外源基因噬菌體的集合。

　　如何構(gòu)建噬菌體展示文庫?

　　1、淘選

　　利用靶點抗原或者細胞組織和噬菌體文庫作用，淘選出能夠和靶點特異性結(jié)合或者功能的展示噬菌體，洗脫下來擴增，經(jīng)過兩到五輪淘選，富集和擴增陽性噬菌體文庫 。

　　2、篩選

　　對陽性噬菌體文庫進行單克隆挑選，通過高通量的測序和功能學(xué)實驗(ELISA)確定單一的能夠和靶點抗原蛋白結(jié)合的抗體片段的蛋白序列和基因序列 。

　　噬菌體文庫構(gòu)建的一般流程

　　1、提取所需RNA或mRNA;

　　2、對多色RNA或mRNA進行反轉(zhuǎn)錄，獲得第一鏈cDNA;

　　3、通過多個引物，將cDNA庫中的輕重鏈復(fù)制并擴增出來;

　　4、在引物上增加酶切位點，再次擴增出cDNA中的輕重鏈;

　　5、利用技術(shù)手段將輕鏈基因和重鏈基因拼接到一起;

　　6、將拼接的輕重鏈整合到噬菌體質(zhì)粒上;

　　7、擴增建立噬菌體TG1庫;

　　8、通過進一步擴增和純化，獲得噬菌體文庫;

　　噬菌體文庫的質(zhì)量主要有文庫的大小、文庫抗體可變區(qū)的多樣性、基因片段層次分步等方面，所以，我們在判斷一個噬菌體文庫好壞時，完全可以從這幾個方面入手查看。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供噬菌體文庫構(gòu)建服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。