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什么是噬菌體文庫構(gòu)建?它的原理是怎樣的?

發(fā)表時間:2023-03-24 訪問次數(shù):1329

  噬菌體展示技術(shù)在新藥研發(fā)方面有著廣泛的使用,在之前我們和大家聊過有關(guān)噬菌體的相關(guān)只是,大家可以點擊“什么是噬菌體展示技術(shù)?它的主要作用有哪些?”去詳細了解一下。后來有很多客戶問到有關(guān)噬菌體展示文庫構(gòu)建方面的知識,有鑒于此,我們在這里統(tǒng)一和大家聊一聊。

  什么是噬菌體展示文庫構(gòu)建?

  我們知道,噬菌體展示技術(shù)就是通過將外源基因插入到噬菌體蛋白外殼基因的適當(dāng)位置,讓其隨著噬菌體的傳代,在子代噬菌體表面得到展示,而后通過篩選和淘選的過程后,獲得我們所需蛋白的方式。而噬菌體展示文庫則是多種不同外源基因噬菌體的集合。

  如何構(gòu)建噬菌體展示文庫?

  1、淘選

  利用靶點抗原或者細胞組織和噬菌體文庫作用,淘選出能夠和靶點特異性結(jié)合或者功能的展示噬菌體,洗脫下來擴增,經(jīng)過兩到五輪淘選,富集和擴增陽性噬菌體文庫 。

  2、篩選

  對陽性噬菌體文庫進行單克隆挑選,通過高通量的測序和功能學(xué)實驗(ELISA)確定單一的能夠和靶點抗原蛋白結(jié)合的抗體片段的蛋白序列和基因序列 。

  噬菌體文庫構(gòu)建的一般流程

  1、提取所需RNA或mRNA;

  2、對多色RNA或mRNA進行反轉(zhuǎn)錄,獲得第一鏈cDNA;

  3、通過多個引物,將cDNA庫中的輕重鏈復(fù)制并擴增出來;

  4、在引物上增加酶切位點,再次擴增出cDNA中的輕重鏈;

  5、利用技術(shù)手段將輕鏈基因和重鏈基因拼接到一起;

  6、將拼接的輕重鏈整合到噬菌體質(zhì)粒上;

  7、擴增建立噬菌體TG1庫;

  8、通過進一步擴增和純化,獲得噬菌體文庫;

  噬菌體文庫的質(zhì)量主要有文庫的大小、文庫抗體可變區(qū)的多樣性、基因片段層次分步等方面,所以,我們在判斷一個噬菌體文庫好壞時,完全可以從這幾個方面入手查看。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供噬菌體文庫構(gòu)建服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。