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什么是細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)?盤點(diǎn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染的原理及其的特點(diǎn)

發(fā)表時間:2023-03-08 訪問次數(shù):769

  細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)在蛋白抗體制備的一種常用方法,而且隨著技術(shù)的不斷發(fā)展,細(xì)胞轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常用工具。而且在基因功能、基因調(diào)控等方面有著廣泛的使用。那么,具體什么是細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)?它的原理和特點(diǎn)都有哪些呢?今天普健生物就和大家具體聊聊。

  什么是細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)?

  所謂的細(xì)胞轉(zhuǎn)染,其實(shí)就是將外源分子導(dǎo)入到真核細(xì)胞內(nèi),通過這些外源細(xì)胞來該表真核細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)能力的一種技術(shù)。

  使用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)的目的是什么?

  細(xì)胞轉(zhuǎn)染的主要目的就是研究基因的功能和基因的產(chǎn)物,對細(xì)胞中的一些表達(dá)進(jìn)行抑制或增強(qiáng),控制細(xì)胞內(nèi)蛋白產(chǎn)生。

  轉(zhuǎn)染為什么分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染?

  所謂的瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的主要區(qū)別其實(shí)就是其是否需要將外源核酸整合到宿主染色體上;

  瞬時轉(zhuǎn)染:不用將外源基因整合到宿主染色體中,通常這個情況只維持幾天,多用于啟動子和其他調(diào)控元件的分析;

  穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:將外源基因整合到宿主染色體中,也可以作為一種游離體存在,通過一些選擇標(biāo)記,從而得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系;

  那么,有哪些轉(zhuǎn)染方法及其應(yīng)用呢?

  1、磷酸鈣法。通過磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜,通過細(xì)胞內(nèi)吞,實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染。但是不適合用于原代細(xì)胞,雖然操作簡便,但是重復(fù)性差;

  2、電穿孔法。通過高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位,使得DNA通過膜小孔進(jìn)入。但是容易造成細(xì)胞死亡,DNA和細(xì)胞用量大,而且需要根據(jù)不同細(xì)胞的類型進(jìn)行電穿孔實(shí)驗(yàn);

  3、陽離子脂質(zhì)體法。通過將帶正點(diǎn)的脂質(zhì)體與核酸帶浮點(diǎn)的磷酸基團(tuán)形成的復(fù)合物形成細(xì)胞內(nèi)吞。這個方法適用性較廣,重復(fù)性好,但是轉(zhuǎn)染的時候需要去除血清,且轉(zhuǎn)染后細(xì)胞類型變化較大;

  4、病毒介導(dǎo)法。通過侵染宿主的病毒將外源基因整合到染色體中。對于那些難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞來說,這個方法非常合適,但是所攜帶的基因不宜太大,且細(xì)胞需處于分裂期;

  5、基因槍法。通過重金屬吸附DNA,將其用彈道射入細(xì)胞,使得其隨著DNA在細(xì)胞內(nèi)釋放、表達(dá)。使用范圍相對來說較廣;