真核蛋白表達(dá)相信大家不會(huì)覺(jué)得陌生，我們前面和大家具體聊過(guò)有關(guān)真核表達(dá)的幾種方式以及其優(yōu)勢(shì)所在：“常見(jiàn)的真核表達(dá)系統(tǒng)有哪幾種?它們各自有哪些優(yōu)勢(shì)?”。今天普健生物再和大家具體聊聊有關(guān)真核表達(dá)的步驟以及在表達(dá)過(guò)程中導(dǎo)致其表達(dá)低下的原因。

　　真核表達(dá)，顧名思義，就是利用真核細(xì)胞進(jìn)行蛋白表達(dá)的技術(shù)服務(wù)，通常在需要大量高質(zhì)量蛋白的時(shí)候會(huì)采用這個(gè)方式，當(dāng)然了，藥物開(kāi)發(fā)以及生物學(xué)研究上也常常會(huì)使用到。

　　真核表達(dá)服務(wù)的具體步驟一般如下：

　　1、基因克隆。通過(guò)基因技術(shù)將目的基因克隆到真核的表達(dá)載體當(dāng)中去;

　　2、細(xì)胞培養(yǎng)。將載體轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞中，并通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)的方式對(duì)細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增;

　　3、蛋白表達(dá)。通過(guò)操作以及環(huán)境搭配等手段滿(mǎn)足蛋白的表達(dá)條件，使得目的蛋白得以表達(dá);;

　　4、蛋白純化。通過(guò)相關(guān)技術(shù)對(duì)蛋白進(jìn)行純化(具體純化方法可參考“蛋白純化方法之沉淀法的幾種常用方式介紹”);

　　當(dāng)然了，不同的蛋白表達(dá)公司因?yàn)榧夹g(shù)實(shí)力、實(shí)驗(yàn)環(huán)境以及儀器使用等方面的不同，在表達(dá)結(jié)果方面會(huì)存在很大的不同，甚至?xí)霈F(xiàn)表達(dá)量低的情況。為什么會(huì)會(huì)發(fā)生這樣的情況呢?且聽(tīng)普健生物和您具體分析。

　　一般來(lái)說(shuō)，導(dǎo)致蛋白表達(dá)量低下的原因有很多，主要是如下幾種：

　　1、轉(zhuǎn)染效率低。在進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)，有一定的概率會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)染率低的現(xiàn)象(當(dāng)然了，也只有少數(shù)細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)這個(gè)情況)，從而造成蛋白表達(dá)量降低;

　　2、基因轉(zhuǎn)錄水平低。一些基因的表達(dá)會(huì)受到細(xì)胞因子調(diào)節(jié)的原因，造成表達(dá)載體轉(zhuǎn)錄水平低而造成蛋白表達(dá)低的情況;

　　3、翻譯后修飾不完整。在進(jìn)行蛋白修飾的過(guò)程中發(fā)生了異常，導(dǎo)致蛋白結(jié)構(gòu)不完整，從而造成表達(dá)量低的情況;

　　4、表達(dá)的蛋白不穩(wěn)定。表達(dá)后的蛋白在溶液中因?yàn)椴环€(wěn)定的情況，出現(xiàn)失活的現(xiàn)象;

　　5、細(xì)胞毒素的影響。細(xì)胞產(chǎn)生的毒素造成蛋白失活;

　　6、條件不符合。蛋白表達(dá)的環(huán)境達(dá)不到要求，造成蛋白表達(dá)量低;

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