在進(jìn)行重組蛋白制備的過程中，我們常常會(huì)遇到各種各樣的問題，因?yàn)樵喜煌?、制備環(huán)境不同、技術(shù)操作不同以及一些不規(guī)范的小錯(cuò)誤，使得我們所要面對(duì)的問題各不相同。當(dāng)然了，隨著技術(shù)的不斷完善，一些問題得到了良好的解決。但是，因?yàn)橐恍┎僮?，使得很多問題依然存在。今天，普健生物在這里和大家具體聊聊有關(guān)重組蛋白純化過程中出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象的原因及避免方法。

　　1、鎳離子含量過高。在Ni純化過程中，一部分鎳離子會(huì)脫落，因?yàn)槠鋵儆谥亟饘?，?huì)和蛋白凝集并產(chǎn)生沉淀;

　　2、我們搭建的環(huán)境不適合蛋白制備，需要重新考慮溶液濃度、PH值、溫度等方面的因素;

　　3、溶液PH值接近蛋白等電點(diǎn)(一般PH值接近等電點(diǎn)時(shí)，都容易造成蛋白沉淀);

　　4、使用反復(fù)凍融的蛋白。我們知道，每次凍融都會(huì)在一定概率上造成蛋白活性的丟失，反復(fù)凍融則會(huì)造成這個(gè)概率增加;

　　5、長時(shí)間4度保存。長時(shí)間將蛋白保持在4度環(huán)境下，容易滋生細(xì)菌，從而造成蛋白降解和沉淀;

　　如何避免這些問題呢?

　　1、當(dāng)我們用鎳柱來純化蛋白時(shí)，適當(dāng)加入一些EDTA，從而減少重金屬反應(yīng);

　　2、重新分析蛋白的最佳制備環(huán)境，并保持好相應(yīng)的制備環(huán)境;

　　3、加入一些輔助性蛋白來保護(hù)我們所制備的蛋白產(chǎn)品;

　　4、盡量減少蛋白的反復(fù)凍融，盡量制備出來后就使用掉;

　　5、短時(shí)間保存可考慮4度環(huán)境，長期保存還是盡量選擇-20度或-80度;

　　其實(shí)大家不難發(fā)現(xiàn)，在我們進(jìn)行重組蛋白制備的時(shí)候，很多造成沉淀的情況都是一些小問題所導(dǎo)致，只有將這些細(xì)節(jié)方面的工作做好了，蛋白純化工作才能更好地進(jìn)行。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)的重組蛋白制備服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。

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