原核表達相信大家一定不會陌生,簡單來說,就是將需要表達的基因克隆到大腸桿菌中后,大量表達蛋白的一種方式,在蛋白純化、定位、功能分析等方面都有著廣泛的使用。那么,用大腸桿菌來表達重組蛋白有哪些好處?其步驟又是怎樣的呢?
大腸桿菌表達重組蛋白的好處:
1、控制簡單。之前我們就和大家聊過,大腸桿菌背景清晰,且易于成長和控制;
2、成本低。相對哺乳動物表達系統(tǒng)來說,大腸感覺表達蛋白的成本相對更低;
3、質粒選擇多。擁有各種各樣的大腸桿菌菌株及其與之匹配的質粒,選擇更多;
原核表達重組蛋白的步驟如下:
1、獲得目的基因。通過基因重組技術獲得我們所需基因,并對其進行基因測序,以保障目的基因準確信;
2、準備表達載體。從大腸桿菌中找出合適與表達這段序列的質粒;
3、將目的基因插入載體中。將目的基因通過切段、植入等一系列的手段添加到質粒中;
4、宿主菌培養(yǎng)。對宿主菌進行培養(yǎng),實現(xiàn)擴增;
5、誘導蛋白表達。通過外部環(huán)境刺激,誘導所需蛋白得以表達;
6、蛋白分析。對所得蛋白在特異性、活性等方面進行檢測,看其是否為所需蛋白;
7、擴增及純化。對符合需求的宿主菌進行擴增,而后進行大批量蛋白生產(chǎn)及純化;
大腸桿菌表達重組蛋白的注意事項:
1、需要根據(jù)蛋白的最終應用來考慮表達載體,可選擇融合表達;
2、融合表達時,外源DNA不能對轉錄、翻譯的過程造成干擾;
大家應該不難看出,原核表達重組蛋白的方式其實和普通原核蛋白表達的方式?jīng)]有太大的不同,只是說在獲得目的基因的方式上有所不同,而且需要選擇特定的質粒才能實現(xiàn)蛋白的表達。而就其他步驟而言,相差表達,但是在一些細節(jié)方面肯定會有所不同,這就需要有相關的經(jīng)驗來輔助了。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白表達服務,如果您有相關需求,歡迎來電咨詢。
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