大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)作為最常用來進(jìn)行蛋白表達(dá)的五大系統(tǒng)之一,已經(jīng)算得上是非常成熟地表達(dá)系統(tǒng)了。相對其他系統(tǒng)而言,其遺傳背景清晰、操作簡單、表達(dá)水平高、成本低、周期短等特點,使得其的使用非常的廣泛,重組蛋白表達(dá)也常常會使用到大腸桿菌。那么,您知道大腸桿菌表達(dá)重組蛋白時常常會遇到哪些問題嗎?今天普健生物就和您具體聊聊。
1、為什么要用到大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)?它的優(yōu)勢有哪些?
我們之前說到過,大腸桿菌繁殖速度快,大概20分鐘就能實現(xiàn)倍增,而且轉(zhuǎn)染率高;容易實現(xiàn)高密度培養(yǎng),可以通過溫度來實現(xiàn)直接控制;
2、哪些方法可以去除蛋白標(biāo)簽?
去除重組蛋白標(biāo)簽的方法主要有兩種:酶消化法和化學(xué)裂解法。酶消化法其實就是利用腸激酶、凝血酶、煙草蝕刻病毒蛋白酶等去溢出蛋白標(biāo)簽的方式,是現(xiàn)階段最常用的標(biāo)簽去除方法?;瘜W(xué)裂解法他剛才用于融合伴侶蛋白的移除,使用范圍相對來說要窄一些,但是勝在價格便宜;
3、所謂的最合適的表達(dá)宿主有哪些?
其實所的最合適的表達(dá)宿主需要結(jié)合實際情況以及蛋白需求來進(jìn)行選擇,成本投入不同、技術(shù)實力不同等選擇的宿主也是各不相同。重組蛋白原核表達(dá)最常采用BL21和K-12來作為表達(dá)宿主;
4、為什么會出現(xiàn)低表達(dá)甚至無表達(dá)?
誘導(dǎo)前后蛋白純在毒素或者表達(dá)過程中密碼子有偏向性都會造成蛋白表達(dá)過低或是無表達(dá)的情況。我們可以通過控制本底表達(dá)水平、控制誘導(dǎo)表達(dá)水平、優(yōu)化質(zhì)粒DNA等方式來進(jìn)行調(diào)控;
5、蛋白包涵體形成的原因有哪些?
蛋白形成的過程中如果形成了不正確的二硫鍵、出現(xiàn)錯誤折疊、缺少翻譯后修飾等過程都可能會造成蛋白包涵體形成。我們可以通過表達(dá)分子伴侶、移除誘導(dǎo)劑、低溫誘導(dǎo)表達(dá)、改變?nèi)诤习閭H蛋白、該表表達(dá)宿主等一系列的方式來解決這個問題;
總的來說,這些都是我們在操作中會出現(xiàn)的一些小問題,但是,也恰恰是這些小問題制約重組蛋白表達(dá)成功與否。所以,在進(jìn)行重組蛋白表達(dá)時,我們需要有專業(yè)的技術(shù)支持,用于解決各類可能會在遇到的問題。作為一家擁有十余年蛋白抗體制備經(jīng)驗的公司來說,普健生物專業(yè)為廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)的蛋白抗體制備服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來電咨詢。